主题：【资料】转基因油菜籽检验

油菜是一种重要的油料作物，是世界四大主要油料作物之一，在加拿大、印度、中国和欧洲种植面积最大。自1985年Ooms等获得第一棵转基因油菜植株以来，在国内外广泛开展了一系列的研究工作，抗病、抗虫、抗除草剂及高产量、高品质的转基因油菜相继诞生，部分品种已进入商业化或大田试验阶段。近十年来对转基因油菜的研究取得了长足的进展，其中以抗除草剂的“双低”(低芥酸、低硫苷)油菜为主。
一、检测原理
样品经过提取DNA后，针对转基因植物所插入的外源基因的基因序列设计引物，通过PCR技术，特异性扩增外源基因的DNA片段，根据PCR扩增结果，判断该样品中是否含有转基因成分。
二、试剂与材料
引物：根据表11—17的序列合成引物，加超纯水配制成100μmol／L备用，直接用于PCR测试的引物浓度为5μmol／L。
Tris饱和酚、三氯甲烷、液氮、异丙醇、70％乙醇、重蒸水、RNase A、2mg／mL溴化乙锭、DNA分子量标准(100～2000bp)、琼脂糖、10×氯化镁(25mmol／L)、Taq酶(5U／μL)、10×dNTP(含2.5mmol／L dATP，dUTP，dCTP，dGTP)。
lmol／L Tris—HCl缓冲液(pH 8.0)：称取121.1g Tris，溶于800mL水中，搅拌，加入浓盐酸42mL，冷却至室温，用稀盐酸准确调整pH至8.0，分装后高压灭菌备用。
0．5mol／L EDTA(pH 8.0)：在800mL水中加入186.1g EDTA-Na2·2H2O，磁力搅拌器剧烈搅拌，用氢氧化钠调节溶液pH值至8．0(约需20g氢氧化钠颗粒)，然后定容至1L，分装后高压灭菌备用。
DNA抽提缓冲液：量取100mL lmol／L Tris—HCl和50mL EDTA，称取5．0g SDS和16．848g氯化钠，定容至1L，分装后高压灭菌备用。
TE缓冲液(pH 8.0)：量取10mL lmol／L Tris—HCl(pH 8.0)和2mL 0.5mol／L EDTA(pH 8.0)，加水定容至1000mL，分装后高压灭菌备用。
10×PCR缓冲液：含500mmol／L氯化钾，100mmol／L Tris—HCI(pH 8．3)，15mmol／L氯化镁(MgCI2)，0．1％明胶。
50×TAE缓冲液：称取484g Tris．量取114．2mL冰乙酸，200mL 0．5mol／L EDTA(pH 8．0)，溶于蒸馏水中，定容至2L。分装后高压灭菌备用。
10×上样缓冲液：含0．25％溴酚蓝，0．25％二甲苯青FF．30％甘油水溶液。
三、仪器
[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp]基因扩增仪、电泳仪、电泳槽、凝胶分析成像系统、DNA冷冻干燥离心机、冷冻离心机、DNA分析系统、水浴锅、微波炉、微量加样器(0.1～2.5μL、0.5～10μL、2～20μL、10～100μL、20～200μL、200 1000mL)、天平(感量0．001g)、高压灭菌锅、PCR反应管(200μL、500μL两种规格)、Eppendorf离心管(1．5mL)。