原文由 夏天的雪(bingwang228) 发表:面粉基质过前处理后,提取液过得小柱,粗看谱图,好像就是柱子没把呕吐毒素给保留在柱子上,在上样和淋洗的步骤就全部下来了,但是免疫亲和柱的原理就是抗体与抗原的特异性结合,起到保留抗原,除掉其它杂质干扰的原理,而上样液和淋洗液,均不会破坏抗体的活性,只有在洗脱一步,甲醇才会破坏抗体和抗原之间的作用,从而把抗原洗脱下来。提示,大家可以仔细看下谱图,提示一:谱图上的峰都是人工定的;提示二:注意下呕吐毒素的化学结构,它在218nm下吸收如何,提示三:标准品中溶剂的截止波长大家知道是多少吗
这个用的标准品过柱吗?上样液和淋洗液中都做出了呕吐毒素,感觉是待测物质没有在免疫亲和柱中保留。是否是柱子保存不当失效了
原文由 乐知者(v2900665) 发表:看了几个测定呕吐毒素的标准,检测波长都在220nm,此波长检测呕吐毒素应该是没有问题的;标准品中用到了乙酸乙酯,乙酸乙酯的吸收截止波长在256nm,在低波长可能会有吸收,但是看别人的讨论该物质会在C18柱上会有拖尾,但是色谱图中的色谱峰还是可以的。标样溶液中含有乙酸乙酯和甲醇,会不会免疫亲和柱在上标样的过程中标液中的溶剂破坏了抗体,导致上样时抗原无法与抗原结合
面粉基质过前处理后,提取液过得小柱,粗看谱图,好像就是柱子没把呕吐毒素给保留在柱子上,在上样和淋洗的步骤就全部下来了,但是免疫亲和柱的原理就是抗体与抗原的特异性结合,起到保留抗原,除掉其它杂质干扰的原理,而上样液和淋洗液,均不会破坏抗体的活性,只有在洗脱一步,甲醇才会破坏抗体和抗原之间的作用,从而把抗原洗脱下来。提示,大家可以仔细看下谱图,提示一:谱图上的峰都是人工定的;提示二:注意下呕吐毒素的化学结构,它在218nm下吸收如何,提示三:标准品中溶剂的截止波长大家知道是多少吗