我从2016年开始接触
液相,做的就是食品中玉米赤霉烯酮的检测。用的仪器是安捷伦的1200,带荧光检测器。上机都没有什么好说的,按照省疾控给的操作手册来,有时候仪器不同具体的技术参数也不太一样,但是不会偏差太大。主要说一下前处理。
手册要求的前处理是用90%乙腈+水来提取,将样品和提取液和5gNACl加入具塞三角烧瓶中萃取,然后加水稀释过柱子,过好柱子后加10mL蒸馏水,抽干后用1mL甲醇洗脱,氮吹干后用1mL乙腈溶解过滤上机。手册给了两种萃取方案,一个是涡旋混匀,一种是摇床。由于涡旋震荡一次只能震荡一个三角烧瓶,但是摇床却可以放十几个,而且做加标回收发现两者的回收率基本上没什么差异,都在95%-99%之间。于是2016年就用的手册的方法来,到了2017年时间比较紧,我决定用50mL离心管萃取。而且想了一下NaCl的作用,一般有机萃取过程中加NaCl就是为了防止乳化,但是操作过程中发现无论加不加NaCl食用油都会加水后出现乳化现象,但是这个乳化并不影响过柱子,让我比较意外。所以后来就不加NaCl了,这样也省去了后面加10mL蒸馏水洗脱无机盐的过程,节省了时间。再就是氮吹,经过氮吹后发现回收率会下降,10-20个百分点那种下降,到后来就干脆不氮吹,直接用甲醇过膜上机,效果比氮吹后上机好得多。
还有一个就是:柱子回温问题,我们用的是北京华安麦科的免疫亲和柱子,说明书上写的是回温半个钟头到室温,刚开始为了节省时间,直接在温水里面回温,发现效果不好,回收率低,后来打电话问厂家,厂家说的是回温一定要再室内常温情况下回温,为的是让免疫蛋白回复亲和性,并不是迅速到常温就能解决,一定要慢慢回温,让蛋白回复过来。这也算是为了走捷径但是走了弯路了,这个大家不要向我学习。在不安手册或者国标方法操作之前一定要明白这一步操作的意义是什么,不要盲目跃进。