主题：【第十一届原创】气相色谱质谱联用分析----澳洲鲍鱼的挥发性成分

气相色谱质谱联用分析----澳洲鲍鱼的挥发性成分

前  言
鲍鱼（Abalone）是名贵的“海珍品”之一，四大海味之首，味道不仅鲜美，营养更加丰富，被誉为海洋“软黄金”。鲍鱼是名贵的海洋食用贝类，被誉为“餐桌黄金，海珍之冠”，其肉质细嫩、营养丰富。它包含有丰富蛋白质、维生素Ａ、碳水化合物以及无机盐。其中澳洲大鲍鱼也是很闻名而受欢迎的鲍鱼。相信朋友们也是很喜欢吃美味的鲍鱼的，也想看看里面有什么挥发性香气物质。
本文采用同时蒸馏萃取法提取澳洲大鲍鱼的香气成分，用气相色谱质谱法分析鉴定。用Amdis质谱数据解卷积处理质谱数据，并结合保留指数校正使质谱检索结果更为准确。使用动态范围宽的FID来定量。
1试验部分
1.1 仪器与装置
安捷伦6890N/5973I气相色谱-质谱联用仪，带FID检测器，双进样口分别接两根毛细管柱及MS和FID。
1.2样品
样品： 罐头澳洲鲍鱼（Canned Abanone）样品购于某网上生鲜超市。
所有香气化合物标准品均来自Sigma-Aldrich等主要试剂公司，少数为原料精制标样。C6-C30正构烷混合标准物来自AccuStandard。
1.3 gc/MS条件

1.3.1 色谱条件:
色谱柱（质谱鉴定）：安捷伦HP-Innowax(60m×0. 25 mm ( i.d.)×0.25μm)毛细管柱，连接MS定性；
升温程序： 60℃，以3 ℃/min升至250℃，保持68 min；
色谱柱（FID定量）：安捷伦HP-Innowax (30m×0. 25 mm ( i.d.)×0.25μm)毛细管柱，连接FID定量；
升温程序： 60℃，以5℃/min升至250℃，保持30 min；
载气：gcMS, He,纯度99.999%以上，流速1.2 mL/min;
gc-FID, N2,纯度99.999%以，流速1.0 mL/min；
进样口温度250℃，分流进样，分流比10:1; 进样量：1μl。
检测器：FID， 氢气：30ml/min, 空气：350ml/min, 尾吹：N2，30ml/min, 温度：270℃。
1.3.2质谱条件:
电子轰击（EI）离子源；电子能量70eV；传输线温度250℃；离子源温度230℃；四级
杆温度150℃。SCAN扫描范围：29-400。EMV：1650V。
1.4样品处理及分析方法
采用同时蒸馏萃取法（SDE），取50g罐头澳洲鲍鱼（汁和鲍鱼肉按大致固形物比例取样）样品加入同时蒸馏萃取器的样品烧瓶中，加入250g去离子水，在溶剂烧瓶中加入40ml二氯甲烷，提取时间为2小时。萃取液用无水Na2SO4干燥后用K-D浓缩器浓缩到1ml。分别进样1微升进行gc-MS/FID分析。
在分析样品前，和样品分析完全相同的条件下，用0.05%的C6-C30的正构烷标样注射到gcMS，获得正构烷的保留时间，用于计算保留指数。分析样品后，用软件计算样品各个组分的保留指数，并和标样的保留指数对比来，结合质谱来定性。
事先也用同样方法测定标样的保留指数备用。
2 结果与讨论
2.1 实验结果
罐头澳洲鲍鱼的总离子色谱图（TIC）如下：

图 1罐头澳洲鲍鱼的总离子色谱图（TIC）

2.2数据处理：
从总离子色谱图（TIC）看出，前面的挥发性组分的峰一般较小，响应不高，后面一些组分峰较高一些。先用Amdis质谱数据解卷积处理质谱数据，减少本底干扰，对共流出峰拆分，提取出大峰下面的峰或隐藏在里面的色谱峰。同时用Amdis的MSL质谱数据库和工作站的PBM（L）质谱数据库检索，并结合保留指数来鉴定峰。所有保留指数均由标准样品测定。极少数没有保留指数的化合物，参照其它资料和以往的经验，在保证良好匹配度的情况下确认。由于FID的动态线性范围很宽，定量结果稳定，复杂的多挥发性组分一般用气相色谱FID来定量，而不用质谱总离子(TIC)来定量。用FID检测器的结果计算鲍鱼挥发性组分的含量。

图2 Amdis拆分示例图

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2.3鲍鱼挥发性成分

表 鲍鱼挥发性成分表

			FID
No	Time	Name	area%
1	5.631	PYRAN, DIHYDRO-	0.255
2	5.894	DIACETYL	0.359
3	6.001	ALDEHYDE C 5	0.120
4	6.24	PENTANAL, 2-METHYL-	0.178
5	6.347	BUTANOL, 2-METHYL-2-	0.587
6	6.479	PENTANONE, 4-METHYL-2-	0.039
7	7.494	PENTANEDIONE, 2,3-	0.015
8	7.697	DIOXANE, 1,4-	0.008
9	7.876	BUTYL ACETATE	0.008
10	8.067	DIMETHYL DISULPHIDE	0.012
11	8.199	ALDEHYDE C 6	0.116
12	8.593	TIGLINALDEHYDE	0.015
13	9.764	BUTYL ALCOHOL	0.128
14	10.337	PENTENOL, 1,3-	0.019
15	10.719	ALLYL BUTYRATE	0.008
16	11.412	PYRIDINE	0.062
17	11.448	HEPTANONE, 2	0.035
18	11.591	ALDEHYDE C 7	0.174
19	12.165	METHYL BUTENAL-3,2	0.271
20	12.607	PYRAZINE	0.070
21	13.956	BUTANONE, 3-HYDROXY-3-METHYL-2-	0.054
22	14.888	ACETALDEHYDE, 2-METHYLTHIO-	0.043
23	14.995	METHYLPYRAZINE, 2-	0.081
24	15.7	THIAZOLE, 4-METHYL-	0.027
25	15.987	ACETYL METHYL CARBINOL	0.796
26	16.226	ALDEHYDE C 8	0.035
27	16.727	PROPANOL, 2-OXO-	0.630
28	18.041	DIMETHYLPYRAZINE, 2,6-	0.012
29	18.101	FORMAMIDE, N,N-DIMETHYL-	0.054
30	18.878	PENTANONE, 3-HYDROXY-2-	0.023
31	18.985	DIMETHYLPYRAZINE, 2,3-	0.008
32	20.526	BUTANONE, 1-HYDROXY-2-	0.066
33	20.98	DIMETHYL TRISULPHIDE	0.066
34	21.732	ALDEHYDE C 9	0.220
35	22.019	ETHLENE GLYCOL MONOBUTYL ETHER	12.366
36	23.667	OCTENAL, 2E-	0.012
37	24.659	OCTENOL, 1,3-	0.077
38	25.077	METHYLTHIOPROPANAL, 3-	0.170
39	25.22	ACETIC ACID	0.035
40	25.59	FURFURAL	0.394
41	26.689	OCTADIEN-3-OL, 1,5Z-	0.027
42	26.892	ISOOCTANOL	0.035
43	27.108	ISOMENTHONE	0.046
44	27.669	ALDEHYDE C10	0.039
45	28.326	BUTANDIOL, 2-METHYL-2,3-	0.054
46	28.911	BENZALDEHYDE	0.696
47	30.297	LINALOOL	0.015
48	30.786	ALCOHOL C 8	0.015
49	31.193	DIMETHYL SULPHOXIDE	0.139
50	31.563	ISOPULEGOL	0.004
51	32.495	NONADIENAL, 2E,6Z-	0.031
52	32.662	2(3H)-Furanone, dihydro-3-methyl-?	0.023
53	33.092	MENTHOL, NEO-	0.019
54	33.785	VALEROLACTONE, GAMMA-	0.081
55	34.035	BUTYROLACTONE, 2-METHYL-GAMMA-	0.189
56	34.573	METHYLACETYLPYRAZINE-2,3-	0.166
57	35.469	MENTHOL	2.114
58	35.672	PHENYLACETALDEHYDE	0.077
59	35.875	ACETYLTHIAZOLE-2	0.112
60	36.651	FURFURYL ALCOHOL	0.120
61	38.658	TERPINEOL, ALPHA-	0.019
62	39.411	FURANONE, 3-METHYLENE-4,5-DH-2(3H)-	0.070
63	39.65	NONENOL, 2E-	0.046
64	40.486	ANILINE, N-ETHYL-	0.008
65	42.433	CITRONELLOL	0.050
66	44.523	CITRONELLYL BUTYRATE	0.139
67	45.706	ANETHOLE CIS-	0.100
68	46.888	ETHYL LAURATE	0.178
69	47.366	GUAIACOL	0.035
70	48.166	BENZYLALCOHOL	0.058
71	49.074	DODECADIENAL, 2E,6E-	0.031
72	49.934	PHENYLETHYL ALCOHOL, 2-	0.050
73	50.34	BHT	0.004
74	52.323	HEPTANOIC ACID	0.015
75	52.956	ACETYLPYRROLE-2	0.158
76	54.784	PHENOL	0.046
77	55.763	PYRROLIDONE, 2-	0.062
78	59.382	CYCLOHEXADIENONE, 2,6-DITERT.-BUTYL-4-HYDROXY-4-METHYL-2,5-	0.549
79	59.466	AMYL SALICYLATE	0.050
80	60.481	HEXENYL BENZOATE, 3Z-	0.278
81	61.294	TRIDECENOL, 2E-	0.506
82	62.56	PELARGONIC ACID	0.112
83	62.799	ALCOHOL C14	0.054
84	66.107	HEPTADECANAL	0.900
85	70.849	Octadecanal	1.159
86	71.924	ALCOHOL C16	0.448
87	74.301	INDOLE	0.073
88	76.272	LAURIC ACID	0.622
89	77.443	ETHYLVANILLIN	0.058
90	79.115	VANILLIN	0.012
91	80.465	Octadecanol	11.582
92	80.883	BIPHENYL, 2-HYDROXY-	0.023
93	82.663	Tetradecanoic acid	0.012
94	83.571	NONYLPHENOL ISOMER	0.116
95	84.204	Phenol, nonyl-	0.367
96	84.669	MYRISTIC ACID	15.280
97	84.813	PHENOL, 4-(2,4,4-TRIMETHYL-2-PENTYL)-	0.282
98	88.874	PENTADECANOIC ACID	5.117
99	92.016	PHENYLETHYL SALICYLATE, 2-	0.835
100	94.416	PALMITIC ACID	24.439
101	96.232	Octadecenoic acid isomer	1.936
102	100.676	C17 ACID	2.044
103	109.18	STEARIC ACID	1.979
104	111.916	OLEIC ACID	7.350
Sum	98.90

   

从上述结果来看，从鲍鱼里面一共鉴定测定了104个挥发性组分，占总量的98.90%。丰富的脂肪醛，苯甲醛和醇，酮，吡嗪类，硫醚化合物，含氮化合物吲哚，C12，C14，C16烷酸，油酸等酸类含量较高，可能和鲍鱼本身及基质有关；呋喃类，Acetoin等来自样品基质。检测到乙二醇单丁醚（ETHLENE GLYCOLMONOBUTYL ETHER，出峰处保留指数为1400，查得保留指数为1403）含量较高，尚不清楚从哪里而来，作用是什么，需进一步考察。

图3 乙二醇单丁醚质谱检索对照图