1 方法依据本方法依据SN 0340-95 《出口粮谷、蔬菜中百草枯残留量的测定》。
2 方法原理试样中百草枯用硫酸溶液煮沸回流加以提取,提取液经阳离子交换树脂柱净化,百草枯被吸附在树脂上,然后,以饱和氯化铵溶液洗脱,于流出液中加入连二硫酸钠溶液,百草枯被还原为蓝色化合物,用紫外分光光度计进行定量。
3 试剂3.1 硫酸(比重1.84)
3.2 氢氧化钠。
3.3 氯化钠。
3.4 盐酸(比重1.18)
3.5 氯化铵
3.6 L-胺四乙酸二钠(EDTA)
3.7 苯
3.8 连二亚硫酸钠
3.9 硫酸溶液:9mol/L
3.10 盐酸溶液:2mol/L
3.11 氢氧化钠溶液:12.5mol/L
3.12 氢氧化钠溶液:10mol/L
3.13 氢氧化钠溶液:0.3mol/L
3.14 饱和氯化钠溶液:溶解360g氯化钠于1L水中,搅拌溶解,澄清备用。
3.15 饱和氯化铵溶液:溶解370g氯化铵于1L水中,搅拌溶解,过滤备用。
3.16 稀氯化铵溶液:1/10饱和溶液。量取1份饱和氯化铵溶液加入9份水,混匀。
3.17 连二亚硫酸钠溶液:0.2%于0.3mol/L氢氧化钠溶液中。溶解0.20g连二亚硫酸钠于少量0.3mol/L的氢氧化钠溶液中,于棕色容量瓶内以该氢氧化钠定容至100ml,混匀。此溶液必须在临使用前新鲜配制,超过1.5h后不宜使用。
3.18 离子交换树脂:AG 50WX-8,100~200目,在水中浸泡。
3.19 百草枯标准品
3.20 百草枯标准溶液:准确溶解0.0250g百草枯标准品于少量饱和氯化铵溶液中,转移至250ml棕色容量瓶中并以饱和氯化铵溶液准确定容,摇匀,作为标准贮备液,此溶液百草枯二氯化物的浓度为100ug/ml。根据需要再配成适用浓度的标准工作液。
4仪器和设备4.1 紫外分光光度计:具有连续波长与吸收扫描功能,配备5cm比色皿
4.2 粮谷粉碎机:筛板孔径1mm
4.3 组织匀浆机
4.4 减压抽滤装置:配备1000ml抽滤瓶及直径10cm平底漏斗
4.5 加热回流装置:1000ml圆底烧瓶及配套的球形冷凝管。
4.6 净化柱:50ml酸式滴定管。在玻璃珠的下部塞入一小团玻璃棉,高度约0.5~1cm,垂直固定好柱子,加入10ml在水中浸泡并沉降的树脂,分别用50ml饱和氯化钠溶液和50ml水洗柱。注意保持液面略高于树脂层。每个试样测定均须使用一根新制备的柱子。
5分析步骤5.1 提取
称取粮谷试样约50.0g或蔬菜试样200.0g(精确至0.1g)置于1000ml圆底烧瓶中,根据试样的含水量加入适量的水和9mol/L的硫酸溶液,使瓶内溶液的总体积为200~300ml(包括试样的含水量)、硫酸的浓度为2.5mol/L。加入数粒小玻璃珠,连接回流冷凝管。加热至沸(如产生大量气泡可加入几滴正辛醇)并使之回流5h以上。取下烧瓶,冷却,加入500ml水。将提取液倒入已铺垫好双层快速滤纸(含油试样克多垫几层滤纸)的平底漏斗上,用抽滤装置过滤,用少量水分数次洗涤。对非油类试样,将滤液倒入1000ml烧杯中。对含油试样可将滤液倒入1000ml分液漏斗中,然后用100ml苯分三次萃取,收集水相于1000ml烧杯中。于烧杯中的溶液中加入12.5mol/L的氢氧化钠溶液,其体积相当于回流前所加9mol/L硫酸溶液的量,加入5gEDTA,搅拌至完全溶解,加水至溶液总体积约900ml,然后再用10mol/L的氢氧化钠溶液调节PH至9,冷却至室温,将溶液全部倒入1000ml的分液漏斗中备用。
5.2 净化和洗脱
5.2.1净化
将盛有提取液的分液漏斗固定在净化柱的上方(可用洁净的胶管将二者连接),调节活塞,使溶液以10~12ml/min的速度过柱。过柱后移开分液漏斗。然后以5ml/min的速度一次用50ml水、50ml 2mol/L的盐酸溶液、50ml水和50ml稀氯化铵溶液淋洗柱子,弃去所有流出液。
5.2.2洗脱
将上述处理后的柱子用饱和氯化铵溶液洗脱上百草枯,洗脱速度为0.5~1ml/min,收集50ml洗脱液于50ml容量瓶中。
5.3 测定
吸取10ml含包草枯二氯化物为1.0ug/ml的包草枯标准工作液于50ml比色管中,加入2ml连二亚硫酸钠溶液,摇匀后立即倒入5cm比色皿中,置于紫外分光光度计比色皿中进行测定,设定波长从410nm至380nm进行吸光度扫描,选择最大吸收峰处为测定波长λm,然后分别选择λm±4nm处为校正波长λn和λ1
5.4 工作曲线的绘制
分别吸取百草枯标准储备溶液0.00ml、0.05ml、0.10ml、0.25ml、0.50ml、0.75ml、1.00ml和1.50ml于8只100ml容量瓶中,各加入饱和氯化铵溶液至刻度。此工作液百草枯的浓度分别为0.00ug/ml、0.05ug/ml、0.10ug/ml、0.25ug/ml、0.50ug/ml、0.75ug/ml、1.00ug/ml和1.50ug/ml。分别吸取上述工作液10ml于8支50cm比色管中,各加入2ml连二亚硫酸钠溶液,混匀后立即用紫外分光光度计,在λm处以空白液对照测定工作液的吸光度,以吸光度为纵坐标,相应浓度为横坐标绘制标准曲线。
5.5 样品测定
吸取10ml洗脱液于50ml比色管中,加入2ml连二亚硫酸钠溶液,混匀后立即以空白页对照分别测定吸光度
5.6 空白试验
除不称取样品外,按上述测定步骤进行。
6结果计算由下式计算试样中包草枯(以百草枯二氯化物计)的残留量:
X=C×V
1/m
式中:
X—试样中百草枯二氯化物的残留量,mg/kg;
C—从标准曲线中以样品的校正吸光度值(A校)查出对应的百草枯二氯化物的浓度,ug/ml;
m-试样的质量,单位为克(g);
V-洗脱液最终定容体积,单位为毫升(mL);
7试验结果报告7.1校准曲线及线性范围:
工作 曲线 | 顺序号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
浓度(ug/ml) | 0.00 | 0.05 | 0.1 | 0.25 | 0.50 | 0.75 | 1.0 | 1.5 |
吸光值(A) | 0.000 | 0.021 | 0.051 | 0.113 | 0.246 | 0.336 | 0.478 | 0.678 |
回归方程 | y = 0.4569x +0.0033 |
相关系数 | 0.9981 |
7.2 方法的精密度
称取约50.0g样品,按照步骤5处理,平行制备9份样品,计算的含量并求出相对标准偏差,结果见下表所示。
顺序号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 |
1 | 取样量(g) | 50.0039 | 50.0023 | 50.0081 | 50.0106 | 50.0071 | 50.0096 | 50.0032 | 50.0054 | 50.0028 |
吸光度(A) | 0.286 | 0.281 | 0.283 | 0.288 | 0.289 | 0.288 | 0.285 | 0.281 | 0.279 |
百草枯含量(ug) | 15.40 | 15.13 | 15.24 | 15.51 | 15.56 | 15.51 | 15.35 | 15.13 | 15.02 |
浓度 mg/kg | 0.31 | 0.30 | 0.31 | 0.31 | 0.31 | 0.31 | 0.31 | 0.30 | 0.30 |
平均值 | 0.31 (S=0.0039) |
相对标准偏差
RSD(%) | 1.28 |
备注 | 结论:九个平行样品的相对标准偏差为1.28%,小于5%,符合要求。 |
7.3方法的中间精密度
随机选取2名实验人员,按照步骤5测定多菌灵的含量,每个实验者平行测定3份样品,求出两者实验结果的相对标准偏差,结果见下表所示。
表2 中间精密度实验结果
实验者 | 百草枯含量(mg/kg) | 平均结果(mg/kg) | 相对标准偏差(%) |
甲 | 0.31 | 0.30 | 2.49 |
0.30 |
0.30 |
乙 | 0.29 | 0.30 |
0.30 |
0.31 |
接受标准: 从精密度测试所得的6组数据中间精密度测试的相对标准偏差应小于5.0%。 |
7.4方法的准确度
分别向试样中加入一定量的百草枯,使其百草枯的加标浓度为10mg/L的样品2ml、分别制备3份样品,同时测定未加标样品百草枯含量,分别计算回收率、结果见下表所示。
样品 | 标准品 | 样品加标测量值 | 回收率(%) | 平均 回收率(%) |
浓度(mg/kg) M1 | 取样量(g) | 百草枯含量 (mg) | 浓度(mg/ml) | 取样量(ml) | M2 (mg) | 吸光度(A) | 浓度 (mg)M |
12.6 | 50.0309 | 13.5 | 10 | 2 | 10 | 0.603 | 32.7 | 94.5 | 100.8 |
12.6 | 50.0725 | 12.1 | 10 | 2 | 10 | 0.611 | 33.1 | 105.0 |
12.2 | 50.0024 | 11.8 | 10 | 2 | 10 | 0.598 | 32.4 | 103.0 |
备注 | △%=(M- M1)*100/ M2 |
7.5 检出限
DL=0.02mg/kg
取20次平行测定空白样的结果,按IUPAC规定DL=KSb/a
其中K=20
Sb:空白多次测得信号的标准偏差:0.0008
a: 校准曲线的斜率: 0.4569
顺序号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 |
吸光度(A) | 0.007 | 0.008 | 0.007 | 0.006 | 0.007 | 0.006 | 0.008 | 0.007 | 0.008 | 0.007 |
顺序号 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 |
吸光度(A) | 0.006 | 0.007 | 0.007 | 0.008 | 0.006 | 0.006 | 0.008 | 0.007 | 0.008 | 0.008 |
Sb | 0.0008 |
检出限(μg/g ) | 0.02 |
公式 | DL=f*K*Sb/a ( K=3, Sb:空白信号的标准偏差,a:曲线斜率) |
备注 | DL=K*Sb/a |
8 是否对方法偏离?是□否■
9 结论我公司对
出口粮谷、蔬菜中百草枯残留量的测定 的检测符合■/不符合□标准
SN 0340-95要求。