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1 材 料
淫羊藿药材(送检样);甲醇,乙醇(分析纯),乙腈(色谱级);
淫羊藿苷对照品(购自中检院)。
2 仪器与设备 岛津液相LC-20AT配制紫外检测器,紫外可见分光光度计(北京普析),色谱柱安捷伦Zorbax SB C18(250mm*4.6μm*5μm);超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司
)。
3 实验方法3.1 色谱和光谱条件 波长:270nm,流动相:乙腈:水(70:30),柱温30 ℃,紫外测定波长:270nm。3.2 对照品溶液的制备 取淫羊藿苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含0.1 mg的溶液,紫外光谱的浓度稀释至1ml含10 μg即得。
图1 淫羊藿苷标准品色谱图
图2 淫羊藿送检样品色谱图
3.3 供试品溶液的制备 3.3.1 淫羊藿苷测定 取本品粉末(过三号筛)约0.2g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入稀乙醇20ml,称定重量,超声处理1小时,再称定重量,用稀乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。3.3.2 总黄酮 精密量取淫羊藿苷测定项下的供试品溶液0.5ml,置50ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,作为供试品溶液。另取淫羊藿苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含10μg的溶液,作为对照品溶液。分别取供试品溶液和对照品溶液,以相应试剂(甲醇)为空白,照紫外-可见分光光度法,在270nm波长处测定吸光度,计算,即得。4 结果与讨论(1) 本批次样品淫羊藿苷含量较低,样品品质不是很好;
(2)测定总黄酮的过程中开始的时候标品和吸光度一直是负值,重新配制溶液,吸光度依然不在0.2-1.2的范围内;
(3)将仪器重新启动,重新校正波长依然是负值;
(4)最后重新更换比色皿选择新的石英比色皿发现吸光度正常,取比色皿的时候拿错了导致结果异常。
注:紫外检测过程中,比色皿是个重要的配件,必须根据自己的检测物质波长选择,
紫外区200-400nm只能使用石英比色皿,400-900nm可见光区可以用玻璃比色皿,也可使用石英比色皿。