分析工作者在日常工作中，经常会遇到色谱压力升高的现象，随之而来的是柱效的下降、保留时间的异常和色谱峰拖尾等不良现象。此时我们应该考虑流动相中缓冲盐是否加入不当，缓冲盐的使用可调节流动相的pH值，缓解色谱峰拖尾，而添加量过多或类型不对均会对色谱产生不良影响。我们在实验过程中如果使用到极性柱和氨基柱，更应该注意流动相中缓冲盐的添加量，如果过高，缓冲盐随着流动相内水相的提高而析出，造成的问题是色谱柱堵塞，很难清洗。因此本文为大家分享一下缓冲盐的使用经验，希望可以帮助大家顺利开展分析实验。

首先我们明确在流动相中添加缓冲盐的目的:

1.添加缓冲盐控制流动相pH值，有稳定缓冲的作用；2.对峰型起到改善作用，可以改变出峰时间，峰型前沿和拖尾，分离度各个因素。柠檬酸也是一种缓冲试剂，有时候也起到稳定剂，具有防腐剂的效果，也可改善峰形，抑制拖尾等。一般要根据化合物的结构来确定。例如有羧基的话一般加0.05%或0.1%的三氟乙酸，有碱性基团的话一般加0.05%的三乙胺。在质谱检测器的色谱方法中，一般用挥发性缓冲盐，例如甲酸铵、乙酸铵等，而在流动相中一般把酸性试剂和对应的缓冲盐一起添加，如流动相中有甲酸，一般添加甲酸铵缓冲盐。

我们在使用缓冲盐的时候要注意缓冲盐溶液的过期时间，一般两个月后的溶液需要重新配置，因为其挥发性。我们经过精密仪器称量和溶液配制后，在校准后的pH计上得到了不同浓度缓冲盐的pH值，希望可以帮到大家顺利解决分析难题。5mM FANH4溶液的pH=5.8；5mMFANH4+0.1%FA溶液的pH=2.9；5mMFANH4+0.01%FA溶液的pH=3.85；10mM AcNH4溶液的pH=6.65；5mM AcNH4溶液的pH=6.59。

如果出现柱压升高，我们应该考虑是否缓冲盐使用不当，使得缓冲盐析出，堵塞塞板和键合相颗粒之间的孔隙，阻碍流动相传质，引起柱压升高。如果出现相同化合物的保留时间发生变化，我们也应该考虑是否缓冲盐使用不当造成的影响。而柱效下降，一般是有些缓冲盐会渗入到键合相的深处，损害硅胶基体，导致色谱柱键合相流失，柱床变松，柱效下降；ii）凝结在键合相表面，使C18碳链难以舒展，对物质的保留能力下降，导致柱效下降。因此液相色谱仪用过缓冲盐后需要对色谱柱进行冲洗，水中缓冲盐浓度较大时应特别引起注意。

因此在缓冲盐的流动相中使用前和使用后的处理都是有讲究的哦！

使用前的处理：在使用缓冲盐作流动相之前需要用不含缓冲盐的流动相冲洗色谱柱，直至基线平稳。原则上，用于冲洗的流动相与分析时所用的流动相含水的比例相同（或含水更多），不同的只是用于冲洗用的流动相中不含缓冲盐。理由：缓冲盐通常易溶于水，难溶于有机溶剂。用含缓冲盐的（特别是做流动相的水为饱和的缓冲盐溶液时）流动相进行分析时，如果液相色谱仪分析前色谱柱中用于保存色谱柱的流动相中含水的比例相对较小，不先冲洗掉，接下来做样品的时候所用的流动相中如果有机溶剂含量大，而其比例中所含的水又不足以溶解该缓冲盐时，缓冲盐将会在色谱柱柱体上析出，沉积下来，这将可能导致上述对色谱柱的损害. .用与分析时含水比例相同的流动相（与分析用流动相唯一的区别是，用于冲洗的流动相不含缓冲盐）进行冲洗约30min，直至基线平稳。如果该液相色谱仪的色谱柱在接下来很长的一段时间内不使用，要长期保存，则需再加上一步，即用纯的有机溶剂冲洗一遍，直至基线平稳。缓冲液可以提供离子平衡的反离子，并使流动相保持一定的离子强度和ph值，减少拖尾。

使用后的处理：用与分析时含水比例相同的流动相（与分析用流动相唯一的区别是，用于冲洗的流动相不含缓冲盐）进行冲洗约30min，直至基线平稳。如果该色谱柱在接下来很长的一段时间内不使用，要长期保存，则需再加上一步，即用纯的有机溶剂冲洗一遍，直至基线平稳。

另外还需要注意：避免使用盐酸盐，盐酸盐对钢质有腐蚀作用。缓冲液最好要现配现用，往往缓冲液是良好的菌类培养液，隔天或放置长时间实验时会有很多怪现象发生。实验后液相色谱仪不可用有机溶剂直接过度，有机溶剂会处使盐类析出，造成液路或色谱柱堵塞，可用95：5的水甲醇冲洗。使用缓冲液要及时掌握ph范围，做到胸中有数。清洗液路和柱子时，有温控可加热到30摄氏度易于冲洗。长时间用缓冲溶液要注意观察接头处有无析出，若有白色盐类析出，可考虑一定周期用10%硝酸冲洗一下液路（拆下柱子，走30ml，再用5倍水冲洗）可以避免液路的堵塞。选择缓冲液要用可靠的试剂，避免不纯的盐类造成不必要的麻烦。

如果流动相中有机溶剂的比例很高是不能用来冲洗缓冲盐的，是洗不出来的。通常C18柱先用5%-10%的甲醇冲洗，是可以把缓冲盐冲洗出来的，然后用纯的有机溶剂来保护柱子。最好的方法是使用与流动相相同浓度不含盐的流动相进行清洗。但就是速度慢一些。用水是为了快速替换，一般在15分钟以内最好，且用0.8的流速较好.如果用纯水冲，容易造成键合的碳链流失，最好用5%-10%甲醇水溶液冲. 可以用纯水代替流动相中的缓冲液，有机相不变，这样冲洗柱子比较稳妥。

今天的分享到此结束，感谢仪器信息网提供原创大赛平台让大家互相学习！

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主题：【原创】三招教你利用缓冲盐解决色谱难题