主题:【第十三届原创】Sil-NaUA色谱固定相制备

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Sil-NaUA色谱固定相制备

引言



本章设计以表面活性剂NaUA为功能单体,通过一步法点击反应将其枝接到巯基功能化的硅球表面,制备得到了Sil-NaUA色谱固定相。通过傅里叶变换红外光谱仪和热重分析仪对Sil-NaUA色谱固定相进行表征,结果显示Sil-NaUA色谱固定相已被成功制备。进一步研究了Sil-NaUA填充色谱柱的保留机制。基于Sil-NaUA色谱柱典型的亲水作用色谱保留机制,将其应用于亲水性的核苷和核酸碱基、酰胺类物质、黄酮类物质和磺胺类药物的分离分析,展示了良好的亲水分离潜能。

实验部分

试剂和仪器



本章所用试剂和仪器如表所示:

试剂和仪器

试剂和仪器

公司名称

3-巯基丙基)三甲氧基硅烷(MPS95%10-十一烯酸(99%对氨基苯甲酰胺、硫代乙酰胺、烟酰胺、丙二酰胺

阿法埃莎试剂有限公司

偶氮二异丁腈(AIBN

北京伊诺凯科技有限公司

球形多孔硅胶(粒径5 μm孔径300 Å

富士硅化学株式会社

色谱甲醇、乙腈ACN

上海星可高纯溶剂有限公司

无水乙醇、氢氧化钠

天津市汇杭化工试剂有限公司

色谱用纯水

法国Millipore公司的Milli-Q系统纯化

甲苯、氯仿、环己醇、异丙醇

天津市大茂化学试剂厂

尿苷、尿嘧啶、根皮

北京百灵威科技有限公司

腺嘌呤、腺苷

远化学科技(上海)有限公司



试剂和仪器

公司名称

羟查酮、香叶木素、磺胺二甲基嘧啶

美国Sigma-Aldrich化学试剂公司

磺胺嘧啶、磺胺

上海市阿拉丁生化科技有限公司

Nicolet iS20傅里叶变换红外光谱仪

Thermo Fisher公司

GLK型色谱柱装填系统

无锡加克色谱科技有限公司

超声波清洗机

宁波新芝生物科技股份有限公司

P230II高效液相色谱系统

大连依利特分析仪器有限公司

DZF-6020型真空干燥箱

上海博迅实业有限公司

DF-101S集热式恒温加热磁力搅拌器

巩义市予华仪器有限公司

Discovory TGA热重量分析仪

美国TA仪器公司



Sil-NaUA色谱固定相的制备



Sil-NaUA色谱固定相制备需用到严格无水的甲苯,因此需要对甲苯试剂进行前处理具体步骤如下:

1、取干净的白纸、小刀、镊子和长勺备用,将油浴锅温度设为100(甲苯的沸点为110);

2、从试剂瓶中取出钠块少许,将其放于称量纸上,用小刀切成丝状,然后迅速将其放入圆底烧瓶中,倒入甲苯溶液(可见少量气泡出现),然后轻轻摇匀,使其充分接触,加入二苯甲酮作为指示剂

3、连接冷凝装置,充氮气5 min,将内部空气排出,将装置放入油浴锅中,冷凝回流数小时,观察溶液颜色变化,待溶液颜色变为深蓝色时,取下冷凝管,连接角管和锥形瓶;

4、将温度设定为130,进行无水甲苯蒸馏将蒸馏液置于提前干燥好并含有干燥分子筛的试剂瓶中储存,备用;

5溶剂蒸馏完毕后,将装置冷却至室温,将含有钠块的圆底烧瓶取下,加入适量甲醇进行清洗,待钠块完全反应后,洗涤烧瓶,即可。

NaUA制备方法参考文献[59]:取等摩尔数的10-十一烯酸和氢氧化钠分别溶解在无水乙醇中,超声分散均匀后,缓慢将氢氧化钠的乙醇溶液加入到10-十一烯酸的乙醇溶液中,边加边搅拌,逐渐出现白色絮状沉淀物。抽滤去除溶剂,用无水乙醇反复洗涤白色絮状沉淀物,最后冷冻干燥12 h,得到白色粉末NaUA,储存备用。

Sil-NaUA色谱固定相制备过程分为两步,如图2-1所示。第一步为巯基化硅球的制备:首先将30 mL无水甲苯缓慢倒入100 mL圆底烧瓶中,然后称取2.8 g活化球形硅胶悬浮于无水甲苯中,快速加入3.1 mL MPS,混匀后于110在氮气保护下加热搅拌回流反应24 h。反应结束后,冷却至室温,抽滤,依次使用甲苯、甲醇/水和甲醇反复洗涤,然后将其置于110真空干燥过夜,得到巯基功能化硅球(Sil-MPS)。

第二步为十一烯酸钠枝接巯基化硅球的制备:称取2.8 g Sil-MPS加入到100 mL圆底烧瓶中,称取5.6 g NaUA溶解于70 mL甲醇中,充分分散后,加入到100 mL圆底烧瓶中,然后称取300 mgAIBN,三者充分混匀后,于60在氮气保护下加热回流搅拌24 h。反应结束后,冷却至室温,抽滤,依次用水、甲醇/水和甲醇反复洗涤,然后将其置于110真空干燥过夜,得到Sil-NaUA色谱固定相。

Sil-NaUA色谱柱制备



Sil-NaUA色谱柱采用匀浆法装柱,以氯仿-环己醇(9:11,v/v)为匀浆液,2.2 g Sil-NaUA材料与匀浆液充分混匀分散。将混悬液缓慢置于匀浆罐中,以甲醇-异丙醇(1:1,v/v)为顶替液,调节压力至35 MPa,装填色谱柱(150 mm × 4.6 mm)。保持压力30 min装填结束,用甲醇冲洗Sil-NaUA色谱柱
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固定相制备比较麻烦,需要专门厂家才可以做。
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最好还是买商品柱,自己填充均匀性稳定性无法保证。
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