主题:【已应助】固相萃取,待测物回收率太低,是什么原因造成的?

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Ins_32770d48
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最近在使用HPLC-MS-MS测PFAS浓度,利用内标法定量,样品前处理方法为固相萃取,但是回收率特别低,只有50%左右,为了验证淋洗液中是否含有待测物,收集淋洗液和洗脱液一起氮吹,复溶,上机测试,根据测试结果发现,淋洗液中内标物的响应值特别低,导致待测物测出来的浓度特别大,根本没有参考性,这到底是什么原因呢?理论上来说,内标物和待测物性质高度相似,在前处理过程中损失的比例不应该差不多吗?各位大佬能帮我找找原因吗?
推荐答案:123回复于2024/07/19

1.?SPE柱选择不合适:如果SPE柱的吸附剂与目标化合物的化学性质不匹配,可能导致目标化合物未能有效保留。解决方法是选择对目标物有合适保留强度的SPE柱 。
2.?样品溶剂和淋洗液的洗脱梯度过强:如果样品溶剂或淋洗液的极性过强,可能会导致目标化合物过早地被洗脱,造成回收率低。解决方法是降低样品溶剂淋洗液的洗脱强度 。
3.?样品溶液体积或浓度过高:样品溶液体积过大或浓度过高可能导致目标化合物“穿透”SPE柱,即未被保留而流失。解决方法是降低上样量或增加分离柱填充料量 。
4.?SPE柱未进行有效的预处理:SPE柱在使用前需要进行活化和平衡,如果这一步骤未完成,可能影响目标化合物的保留。解决方法是加入溶剂进行活化和平衡 。
5.?目标化合物未被完全洗脱:如果洗脱液的强度不足或体积不够,目标化合物可能未能从SPE柱上完全洗脱。解决方法是提高洗脱液的洗脱强度或增加洗脱液体积 。
6.?萃取重现性差:操作过程中的不一致性,如流速过快或过慢,也可能导致回收率低。解决方法是控制合适的流速,确保操作的一致性 。
7.?基质效应:样品基质可能对目标化合物的保留和洗脱产生影响,导致回收率低。解决方法是优化前处理方案,例如调节洗脱液的强度或更换更合适的SPE柱 。
8.?SPE柱流速过低:如果SPE柱的流速过低,可能会影响目标化合物的保留和洗脱效率。解决方法是确保SPE柱没有被颗粒堵塞,并且样品溶液的粘度适宜 。
9.?目标化合物与杂质有结合:如果目标化合物与样品中的杂质结合,可能会影响其在SPE过程中的保留和洗脱。解决方法是在方法开发阶段对目标化合物进行详细了解,避免与杂质结合 。
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1.?SPE柱选择不合适:如果SPE柱的吸附剂与目标化合物的化学性质不匹配,可能导致目标化合物未能有效保留。解决方法是选择对目标物有合适保留强度的SPE柱 。
2.?样品溶剂和淋洗液的洗脱梯度过强:如果样品溶剂或淋洗液的极性过强,可能会导致目标化合物过早地被洗脱,造成回收率低。解决方法是降低样品溶剂淋洗液的洗脱强度 。
3.?样品溶液体积或浓度过高:样品溶液体积过大或浓度过高可能导致目标化合物“穿透”SPE柱,即未被保留而流失。解决方法是降低上样量或增加分离柱填充料量 。
4.?SPE柱未进行有效的预处理:SPE柱在使用前需要进行活化和平衡,如果这一步骤未完成,可能影响目标化合物的保留。解决方法是加入溶剂进行活化和平衡 。
5.?目标化合物未被完全洗脱:如果洗脱液的强度不足或体积不够,目标化合物可能未能从SPE柱上完全洗脱。解决方法是提高洗脱液的洗脱强度或增加洗脱液体积 。
6.?萃取重现性差:操作过程中的不一致性,如流速过快或过慢,也可能导致回收率低。解决方法是控制合适的流速,确保操作的一致性 。
7.?基质效应:样品基质可能对目标化合物的保留和洗脱产生影响,导致回收率低。解决方法是优化前处理方案,例如调节洗脱液的强度或更换更合适的SPE柱 。
8.?SPE柱流速过低:如果SPE柱的流速过低,可能会影响目标化合物的保留和洗脱效率。解决方法是确保SPE柱没有被颗粒堵塞,并且样品溶液的粘度适宜 。
9.?目标化合物与杂质有结合:如果目标化合物与样品中的杂质结合,可能会影响其在SPE过程中的保留和洗脱。解决方法是在方法开发阶段对目标化合物进行详细了解,避免与杂质结合 。
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xiaolanzi5
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楼上总结的很全面。补充两点,1是前处理是否完全将目标物提取出来;2是有时固相萃取后需要溶剂转换,氮吹和复溶是两个关键步骤,也容易造成目标物损失。
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原文由 123(m3149125) 发表:

1.?SPE柱选择不合适:如果SPE柱的吸附剂与目标化合物的化学性质不匹配,可能导致目标化合物未能有效保留。解决方法是选择对目标物有合适保留强度的SPE柱 。
2.?样品溶剂和淋洗液的洗脱梯度过强:如果样品溶剂或淋洗液的极性过强,可能会导致目标化合物过早地被洗脱,造成回收率低。解决方法是降低样品溶剂淋洗液的洗脱强度 。
3.?样品溶液体积或浓度过高:样品溶液体积过大或浓度过高可能导致目标化合物“穿透”SPE柱,即未被保留而流失。解决方法是降低上样量或增加分离柱填充料量 。
4.?SPE柱未进行有效的预处理:SPE柱在使用前需要进行活化和平衡,如果这一步骤未完成,可能影响目标化合物的保留。解决方法是加入溶剂进行活化和平衡 。
5.?目标化合物未被完全洗脱:如果洗脱液的强度不足或体积不够,目标化合物可能未能从SPE柱上完全洗脱。解决方法是提高洗脱液的洗脱强度或增加洗脱液体积 。
6.?萃取重现性差:操作过程中的不一致性,如流速过快或过慢,也可能导致回收率低。解决方法是控制合适的流速,确保操作的一致性 。
7.?基质效应:样品基质可能对目标化合物的保留和洗脱产生影响,导致回收率低。解决方法是优化前处理方案,例如调节洗脱液的强度或更换更合适的SPE柱 。
8.?SPE柱流速过低:如果SPE柱的流速过低,可能会影响目标化合物的保留和洗脱效率。解决方法是确保SPE柱没有被颗粒堵塞,并且样品溶液的粘度适宜 。
9.?目标化合物与杂质有结合:如果目标化合物与样品中的杂质结合,可能会影响其在SPE过程中的保留和洗脱。解决方法是在方法开发阶段对目标化合物进行详细了解,避免与杂质结合 。
感谢您的解答!还想请教您几个问题:
1、淋洗之后的干燥步骤,目前是用真空泵负压抽干小柱中的水分,直至小柱填料呈流沙状态,大概需要1个半小时,是不是抽的时间太长了,导致待测物流失太多?但是怎样才算把小柱里面的水分抽干了呢(小柱是什么状态)?
2、我尝试收收集了淋洗液,跟洗脱液一起氮吹、复溶、上机测试,看淋洗液中待测物的含量。但是得到的数据来看,淋洗液中内标的响应程度特别小,待测物的响应程度与内标的响应程度的比值很大,导致最后测出来的数据异常大,根本不具有参考性。按理论来说,同位素内标物与待测物的性质高度相似,在固相萃取过程中损失的比例应该差不多,这是什么原因?
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原文由 xiaolanzi5(xiaolanzi5) 发表:
楼上总结的很全面。补充两点,1是前处理是否完全将目标物提取出来;2是有时固相萃取后需要溶剂转换,氮吹和复溶是两个关键步骤,也容易造成目标物损失。
感谢您的解答!
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