主题：【分享】【金秋计划】汉防己甲素靶向SIRT5调控内质网应激和自噬发挥抗黑色素瘤作用

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发表于：2024/09/10 13:23:46 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

传统中药粉防己（Stephaniatetrandra S. Moore）是防己科千金藤属草质藤本植物，汉防己甲素（Tetrandrine，TET）是一种从粉防己中提取的天然双苄基异喹啉生物碱，具有多种药理作用，包括对多种癌症具有抑制活性，然而它对黑色素瘤的影响仍不清楚。

通过体内和体外测定发现TET 对黑色素瘤具有抑制作用，机制上，SIRT5是TET的直接靶标，TET 通过泛素-蛋白酶体系统导致SIRT5降解，导致随后的ROS积累，进而导致过度的内质网应激和自噬阻断，而过表达SIRT5减弱TET诱导的ROS积累。
1、TET抑制黑色素瘤细胞的增殖和活力

作者首先使用多种黑色素瘤细胞系评估了TET 的抗黑色素瘤作用，发现TET对黑色素瘤细胞具有显著的抗增殖、周期阻滞、促凋亡作用

2、TET通过诱导细胞骨架解聚诱导阻断的自噬通量

TET处理后，在细胞内观察到可辨别的不规则液泡，表明其可能具有诱导细胞自噬的潜力。进一步免疫荧光和WB验证发现TET处理后，自噬通量受损。考虑到到微管和微丝系统在协调自噬体与溶酶体的形成、运输和融合中的关键作用，作者研究了TET是否扰乱了它们的正常结构。结果表明， TET破坏了它们在黑色素瘤细胞内的结构完整性。这些发现表明TET诱导的细胞骨架解聚有助于阻断自噬通量

3、TET通过触发ER应激诱导自噬

基于RNA-seq信号通路富集分析，作者发现TET促进了未折叠蛋白反应（UPR）。鉴于在大量文献中已经确定了自噬与内质网应激之间的关联，作者验证发现ATF6介导的ER应激激活了TET处理的黑色素瘤细胞的自噬

4、TET导致大量ROS积累

RNA-seq 结果中ROS响应途径显著富集，为了揭示TET诱导的ER应激和随之而来的自噬阻断的机制，作者研究了其对ROS的影响，发现TET 治疗后线粒体自噬的激活，ROS信号激增。且伴随着 ROS 水平的激增，TET诱导的细胞死亡、细胞增殖和细胞骨架解聚的抑制以及自噬通量的阻断，都通过用ROS清除剂NAC得到有效挽救

5、SIRT5 被确定为TET的直接靶标

接着作者采用Pulldown+MS方法确定了TET的直接靶点，通过整合蛋白质亚细胞定位（线粒体）和GO富集分析，SIRT5成为潜在靶标。进一步作者通过竞争性结合实验、CETSA、ITC实验证实SIRT5与 TET的直接结合，分子动力学模拟1揭示了SIRT5 和 TET 之间的结合模式。此外，作者发现SIRT5 在黑色素瘤组织中表现出表达增加，与患者预后不良相关，且TET 通过泛素蛋白酶体系统下调了黑色素瘤细胞中SIRT5的表达。

6、TET 以 SIRT5 依赖性方式阻碍体内黑色素瘤的生长

为了验证 SIRT5 在 TET 诱导的黑色素瘤细胞死亡中的作用，作者构建了 SIRT5 敲低和过表达细胞，发现SIRT5过表达逆转了TET诱导的黑色素瘤细胞线粒体损伤。最后通过动物模型发现，TET治疗抑制了肿瘤体积和重量，并抑制了SIRT5水平，而在黑色素瘤细胞中过表达SIRT5 后TET 未能抑制增殖和致瘤能力

总结

研究表明TET有效地靶向SIRT5，诱导SIRT5蛋白降解，进而导致线粒体功能障碍，表现为线粒体肿胀、线粒体自噬和ROS生成。研究表明TET 是一种很有前途的治疗黑色素瘤的治疗剂

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