主题：【分享】川西合耳菊中1个新的艾里莫芬烷倍半萜

川西合耳菊（叶格兴嘎保、雨布星嘎布）为常用藏药，来源于菊科合耳菊属植物川西合耳菊Synotis solidaginea (Hand. -Mazz.) C. Jeffrey et Y. L. Chen的干燥地上部分，主要分布于西藏、四川、青海等地区；具有清解毒热、愈伤消炎的功效，常用于治疗跌打损伤、蛇虫毒咬等外伤[1]。川西合耳菊的药用历史悠久，最早记载于《度母本草》，用于治疗疮伤病[2]。藏药经典著作《晶珠本草》记载叶格兴（川西合耳菊）为接骨愈伤药[3]。《四川省藏药材标准》（2020年版）和《西藏自治区地方药材（饮片）质量标准》（2023年版）均收载了川西合耳菊[4-5]。尽管川西合耳菊的植物资源丰富，但是对其化学成分研究报道较少。杨爱梅等[6-7]从川西合耳菊石油醚部位分离鉴定了6个艾里莫芬烷倍半萜类成分。李定祥等[8-9]从川西合耳菊正丁醇部位分离鉴定了16个化合物。本课题组前期在测定四川、西藏、青海等不同产地川西合耳菊中8种黄酮类和酚酸类成分含量的过程中，发现川西合耳菊含有多种结构类型的化学成分[10]。为了阐明川西合耳菊的药效物质基础，开发利用其资源，并为临床应用提供依据，本研究对西藏采集的川西合耳菊地上部位进行了系统的化学成分研究，从醋酸乙酯萃取部位分离鉴定了18个化合物（图1），分别鉴定为(2R,4S,5R,8R,10S)-2-angeloyloxy-8,10-dihydroxy-eremophil-7(11)-en-8,12-olide（1）、(1R,4S,5S,6S,8R,10S)-1,10-epoxy-6,8- dihydroxy-eremophil-7(11)-en-8,12-olide（2）、(4S, 5R,8S,10S)-8,10-dihydroxy-eremophil-7(11)-en-8,12-olide（3）、(4S,5R,8R,10S)-10-hydroxy-eremophil- 7(11)-en-8,12-olide（4）、橐吾内酯[(4S,5R)-eremophil- 1(10),7(11),8(9)-trien-8,12-olide，5]、4,5-O-二咖啡酰奎宁酸甲酯 [4,5-di-O-caffeoylquinic acid methyl ester，6]、异绿原酸C（4,5-di-ca?eoylquinic acid，7）、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸甲酯（3,5-di-O- caffeoylquinic acid methyl ester，8）、异绿原酸A （3,5-di-caffeoylquinic acid，9）、1,4-O-二咖啡酰奎宁酸甲酯（1,4-di-O-caffeoylquinic acid methyl ester，10）、绿原酸（chlorogenic acid，11）、咖啡酰苹果酸 [(2'R)-phaselic acid，12]、咖啡酸甲酯（caffeic acid methyl ester，13）、反式咖啡酸（trans caffeic acid，14）、山柰酚-3-O-(6''-O-乙酰基)-β-D-吡喃葡萄糖苷[kaempferol-3-O-(6''-O-acetyl)-β-D-glucopyranoside，15]、紫云英苷（astragalin，16）、2-苯乙基-β-D-吡喃葡萄糖苷（2-phenylethyl-β-D-glucopyranoside，17）、桦褐孔菌二糖（inotodisaccharide，18）。其中化合物1为新的艾里莫芬烷倍半萜，命名为川西合耳菊内酯A（synotisolidolide A），化合物2、4、5、10、12、13、15、17、18为首次从合耳菊属植物中分离得到。
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1 仪器与材料
Bruker Avance Neo 600 MHz核磁共振波谱仪（德国Bruker公司）、UPLC-Q-Orbitrap高分辨质谱仪（美国Thermo Fisher Scientific公司）、Chirascan qCD圆二色光谱仪（英国应用光物理公司）、PuriMAster-3000A制备液相色谱仪（上海科哲生化科技有限公司）、聚酰胺（80～120目，浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂）。柱色谱硅胶（200～300目）和GF254薄层硅胶板由青岛海洋化工有限公司生产。Ultimate-XB色谱柱 C18（250 mm×10 mm，5 μm）、Ultimate-XB C18反相材料（40～70 μm）、色谱纯甲醇和乙腈均由月旭科技（上海）股份有限公司生产。超纯水由PALL Cascada纯水机（美谷富迪生物仪器有限公司）制备。
川西合耳菊地上部分采自西藏林芝市米瑞乡玉荣增村，经成都中医药大学药学院吕光华教授鉴定为菊科植物川西合耳菊S. solidaginea (Hand. -Mazz.) C. Jeffrey et Y. L. Chen，标本（CXHER20191125）保存于成都中医药大学药学院标本中心。
2 提取与分离
川西合耳菊干燥地上部位9.5 kg，粉碎，用70%乙醇回流提取3次，每次1.5 h。提取液滤过、减压浓缩至稠膏后，将其分散在水中，依次用石油醚、醋酸乙酯和正丁醇萃取。醋酸乙酯萃取部分浓缩至浸膏（399 g），经硅胶柱色谱分离，以二氯甲烷-甲醇（20∶1～0∶1）梯度洗脱，经薄层色谱检测合并后，得到4个流分（Fr. A～D）。
Fr. A（43 g）经硅胶柱色谱，二氯甲烷-甲醇（100∶1～0∶1）梯度洗脱，合并得6个流分（Fr. A1～A6）。Fr. A1（5 g）经硅胶柱色谱分离，石油醚- 二氯甲烷（2∶1～0∶1）梯度洗脱，结晶，得化合物5（382 mg）。Fr. A5（10 g）经硅胶柱色谱，二氯甲烷-甲醇（20∶1～5∶1）梯度洗脱，再经制备高效液相色谱纯化，乙腈-水（36∶64～90∶10）梯度洗脱，得化合物1（4.1 mg，tR＝66 min）、3（7.1 mg，tR＝33 min）和4（3.8 mg，tR＝45 min）。
Fr. B（68 g）经硅胶柱色谱分离，二氯甲烷-甲醇（100∶1～0∶1）梯度洗脱，得12个流分（Fr. B1～Fr. B12）。Fr. B2（5 g）经硅胶柱色谱分离、醋酸乙酯-甲醇（20∶1～10∶1）梯度洗脱，制备高效液相色谱纯化、甲醇-水（40∶60～65∶35）梯度洗脱，得化合物2（7.1 mg，tR＝28 min）。Fr. B4（0.15 g）经制备高效液相色谱纯化，甲醇-水（10∶90～55∶45）梯度洗脱，得到化合物14（9.1 mg，tR＝27.5 min）。Fr. B7（4 g）经硅胶柱色谱分离，二氯甲烷-甲醇（20∶1～0∶1）梯度洗脱，制备高效液相色谱纯化（甲醇-水20∶80～55∶45），得化合物10（6.8 mg，tR＝30 min）、15（6.1 mg，tR＝38 min）和17（6 mg，tR＝26 min）。Fr. B12（0.2 g）经制备高效液相色谱分离，甲醇-水（20∶80～90∶10）梯度洗脱，得化合物18（22.8 mg，tR＝33 min）。
Fr. D（138.6 g）经硅胶柱色谱，二氯甲烷-甲醇（20∶1～0∶1）梯度洗脱，得5个流分（Fr. D1～D5）。Fr. D2（15 g）经聚酰胺柱色谱分离，乙醇-水（10∶90～100∶0）洗脱；C18反相硅胶柱色谱分离，甲醇-水（30∶70～90∶10）洗脱，得Fr. D2.1～D2.4。Fr. D2.1（5 g）经硅胶柱色谱分离，醋酸乙酯-甲醇-水（30∶1∶1～15∶1∶1）梯度洗脱，得化合物11（115.3 mg）、12（872 mg）和13（8 mg）。Fr. D2.2（7 g）经硅胶柱色谱分离，醋酸乙酯-甲醇-水（100∶1∶1～15∶1∶1）洗脱，得化合物6（1.146 2 g）、8（263 mg）和16（392.6 mg）。Fr. D2.4（300 mg）经过制备高效液相色谱纯化，甲醇-水（40∶60～70∶30）梯度洗脱，得化合物9（20.4 mg，tR＝14 min）和7（10.4 mg，tR＝20 min）。
3 结构鉴定
化合物1：白色粉末。(nm):285.14（0.22）。(cm?1): 3 419、1 660、1 614、1 585、1 391、1 354。根据HR-ESI-MS数据（[M－H]? m/z 363.181 30，计算值363.181 55），确定其分子式为C20H28O6，不饱和度为7。1H-NMR谱（表1）显示化合物1具有5个甲基信号，其中1个角甲基质子信号δH 1.08 (s, 3H)、3个烯碳甲基信号δH 1.93 (dq, J = 7.2, 1.8 Hz, 3H), 1.84 (brs, 3H), 1.83 (brs, 3H)、1个仲碳甲基信号δH 0.94 (d, J = 6.6 Hz, 3H)；1个三取代烯氢质子信号δH 6.09 (qq, J = 7.2, 1.8 Hz, 1H)，1个连氧次甲基信号δH 4.84 (m, 1H)。13C-NMR谱（表1）显示该化合物有21个碳信号，包括2个酯羰基信号δC 173.9和168.9，1个三取代双键和1个四取代双键δC 159.7、138.6、129.2和124.0，3个连氧碳信号δC 104.2、75.1和70.2，5个甲基信号δC 20.7、16.5、15.9、15.2和8.4。以上NMR数据表明该化合物中存在1个当归酰氧基。化合物1的NMR数据与已报道的化合物1β-angeloyloxy- 8β,10β-dihydroxy-eremophil-7(11)-en-8α,12-olide的相似[11]。两者的第1个区别在于已知化合物中连接在C-1位的当归酰氧基在化合物1中连接在C-2位，1H-1H COSY谱（图2）中的自旋偶合片段H3-15/H-4/H2-3/H-2/H2-1和HMBC谱（图2）中H-2与C-1'相关，证实了以上区别；第2个区别在于两者在C-8位的化学位移不同，已知化合物C-8位的化学位移从δC 101.5向低场位移至δC 104.2，提示化合物1在C-8上的羟基构型与已知化合物的相反，为α构型。比较化合物1与1β-angeloyloxy-8β,10β- dihydroxy-eremophil-7(11)-en-8α,12-olide在C-4、C-5和C-10的化学位移（δC 46.8 vs45.8，32.5 vs33.4，75.1 vs75.7），表明两者在C-4、C-5和C-10的相对构型一致，均为β构型。根据菊科植物中艾里莫酚烷倍半萜的生源规律，一般C-4和C-5上的甲基均为β构型[12]。该化合物的NOESY中观察到H-2/H-4相关，说明H-2为α构型。综上所述，化合物1具有2种异构体1a (2R,4S,5R,8R,10S) 和1b (2S,4R,5S, 8S,10R)。通过比较实验与计算ECD谱（图3），发现该化合物的实验ECD曲线与1a (2R,4S,5R,8R,10S) 的曲线完全吻合。因此，化合物1的结构鉴定为 (2R,4S,5R,8R,10S)-2-angeloyloxy- 8,10-dihydroxy-eremophil-7(11)-en-8,12-olide。经Sci- Finder检索，化合物1为新化合物，命名为川西合耳菊内酯A（synotisolidolide A）。
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化合物2：白色粉末。分子式为C15H20O5。1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ: 4.84 (1H, d, J = 1.8 Hz, H-6), 3.13 (1H, d, J= 4.8 Hz, H-1), 2.26 (1H, d, J = 13.2 Hz, H-9a), 2.05 (1H, m, H-4), 2.02 (3H, brs, H-13), 1.94 (1H, m, H-2a), 1.92 (1H, m, H-2b), 1.71 (1H, m, H-3a), 1.63 (1H, d, J = 13.2 Hz, H-9b), 1.35 (1H, m, H-3b), 1.05 (3H, d, J = 7.2 Hz, H-15), 1.00 (3H, s, H-14)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 174.3 (C-12), 161.7 (C-7), 125.0 (C-11), 103.0 (C-8), 72.9 (C-6), 63.8 (C-1), 62.8 (C-10), 45.4 (C-5), 44.6 (C-9), 32.8 (C-4), 24.7 (C-3), 21.3 (C-2), 16.4 (C-15), 14.0 (C-14), 8.7 (C-13)。以上数据与文献报道一致[13]，故鉴定化合物2为 (1R,4S,5S,6S,8R,10S)-1,10-epoxy- 6,8-dihydroxy-eremophil-7(11)-en-8,12-olide。
化合物3：白色粉末。分子式为C15H22O4。1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ: 2.68 (1H, d, J = 14.0 Hz, H-6a), 2.46 (1H, d, J = 14.0 Hz, H-6b), 2.37 (1H, d, J = 14.4 Hz, H-9a), 2.00 (1H, d, J = 14.4 Hz, H-9b), 1.82 (3H, brs, H-13), 1.76 (1H, m, H-1a), 1.58 (1H, m, H-2b), 1.40 (4H, m, H-1b, 2a, 3b, 4a), 1.31 (1H, td,  J= 13.6, 4.6 Hz, H-3a), 1.04 (3H, s, H-14), 0.87 (3H, d, J = 6.0 Hz, H-15)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 174.1 (C-12), 160.5 (C-7), 123.5 (C-11), 104.9 (C-8), 75.2 (C-10), 47.4 (C-5), 43.9 (C-9), 35.7 (C-1), 34.6 (C-4), 31.4 (C-6), 30.9 (C-4), 23.0 (C-2), 16.8 (C-15), 15.2 (C-14), 8.4 (C-13)。以上数据与文献报道一致[14]，故鉴定化合物3为 (4S,5R,8S,10S)-8,10-dihydroxy- eremophil-7(11)-en-8,12-olide。
化合物4：白色粉末。分子式为C15H22O3。1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ:5.02 (1H, t, J = 9.0 Hz, H-8), 2.74 (1H, d, J = 13.8 Hz, H-6a), 2.47 (1H, d, J = 13.8 Hz, H-6b), 2.12 (1H, dd, J = 12.6, 6.6 Hz, H-9a), 1.97 (1H, dd, J = 12.6, 10.8 Hz, H-9b), 1.81 (1H, dd, J = 3.0, 1.2 Hz, H-1a), 1.79 (3H, brs, H-13), 1.57 (1H, m, H-2a), 1.46 (1H, m, H-1b), 1.45 (1H, m, H-4), 1.42 (1H, m, H-3a), 1.41 (1H, m, H-2b), 1.30 (1H, m, H-3b), 1.02 (3H, s, H-14), 0.86 (3H, d, J = 6.6 Hz, H-15)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 177.5 (C-12), 164.4 (C-7), 121.1 (C-11), 80.8 (C-8), 75.4 (C-10), 46.2 (C-5), 42.1 (C-9), 36.6 (C-1), 34.8 (C-4), 32.7 (C-6), 31.1 (C-3), 23.3 (C-2), 16.6 (C-15), 15.2 (C-14), 8.3 (C-13)。以上数据与文献报道一致[15]，故鉴定化合物4为 (4S,5R,8R,10S)-10-hydroxy- eremophil-7(11)-en-8,12-olide。
化合物5：黄色柱状结晶（甲醇）。分子式为C15H18O2。1H-NMR (600 MHz, CDCl3) δ: 5.94 (1H, s, H-9), 5.80 (1H, t, J = 3.6 Hz, H-1), 2.84 (1H, d, J = 16.2 Hz, H-6a), 2.25 (2H, m, H-2), 2.23 (1H, m, H-6b), 1.91 (3H, brs, H-13), 1.74 (1H, m, H-4), 1.57 (2H, m, H-3), 1.00 (3H, d, J = 6.6 Hz, H-15), 0.97 (3H, s, H-14)；13C-NMR (150 MHz, CDCl3) δ: 171.7 (C-12), 147.6 (C-8), 147.4 (C-7), 139.3 (C-10), 131.4 (C-1), 120.6 (C-11), 109.7 (C-9), 39.0 (C-4), 37.8 (C-5), 34.9 (C-6), 26.6 (C-3), 26.9 (C-2), 19.7 (C-14), 15.8 (C-15), 8.6 (C-13)。以上数据与文献报道一致[16]，故鉴定化合物5为橐吾内酯。
化合物6：淡黄色粉末。分子式为C26H26O12。1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ: 7.60 (1H, d, J = 15.6 Hz, H-7''), 7.51 (1H, d, J = 15.6 Hz, H-7'), 7.03 (1H, d, J = 1.8 Hz, H-2''), 7.02 (1H, d, J = 1.8 Hz, H-2'), 6.93 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-6''), 6.92 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-6'), 6.76 (2H, d, J = 8.4 Hz, H-5', 5''), 6.30 (1H, d, J = 15.6 Hz, H-8''), 6.17 (1H, d, J = 15.6 Hz, H-8'), 5.55 (1H, m, H-5), 5.12 (1H, dd, J = 8.4, 3.0 Hz, H-4), 4.35 (1H, m, H-3), 3.72 (3H, s, 8-OCH3), 2.32 (1H, m, H-6a), 2.25 (2H, m, H-2a), 2.09 (1H, m, H-6b)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 175.2 (C=O, C-7), 168.5 (C-1''), 167.9 (C-1'), 149.7 (C-7'), 149.7 (C-7''), 147.7 (C-3''), 147.7 (C-3'), 146.8 (C-6''), 146.7 (C-6'), 127.7 (C-4''), 127.5 (C-4'), 123.2 (C-9'), 123.2 (C-9''), 116.5 (C-8''), 116.5 (C-8'), 115.2 (C-5''), 115.1 (C-5'), 114.7 (C-2''), 114.5 (C-2'), 75.8 (C-4), 74.9 (C-1), 69.1 (C-5), 68.6 (C-3), 53.1 (-OCH3, C-8), 38.5 (C-2), 38.3 (C-6)。以上数据与文献报道一致[17]，故鉴定化合物6为4,5-O-二咖啡酰奎宁酸甲酯。
化合物7：白色粉末。分子式为C25H24O12。1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ: 7.60 (1H, d, J = 15.6 Hz, H-7'), 7.52 (1H, d, J = 15.6 Hz, H-7''), 7.03 (1H, brs, H-2''), 7.00 (1H, brs, H-2'), 6.92 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-6''), 6.90 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-6'), 6.75 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-5''), 6.74 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-5'), 6.29 (1H, d, J = 15.6 Hz, H-8''), 6.19 (1H, d, J = 15.6 Hz, H-8'), 5.62 (1H, m, H-5), 5.12 ( 1H, dd, J = 9.0, 3.0 Hz, H-4), 4.37 (1H, m, H-3), 2.30 (1H, m, H-6a), 2.28 (1H, m, H-2a), 2.24 (1H, m, H-6b), 2.11 (1H, m, H-2b)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD)δ: 176.9 (C-7), 168.6 (C-9'), 168.2 (C-9''), 149.7 (C-4', 4''), 147.7 (C-7'), 147.6 (C-7''), 146.8 (C-3'), 146.7 (C-3''), 127.7 (C-1'), 127.6 (C-1''), 123.1 (C-6'), 123.1 (C-6''), 116.5 (C-5'), 116.5 (C-5''), 115.2 (C-2'), 115.1 (C-2''), 114.7 (C-8'), 114.7 (C-8''), 76.1 (C-1), 75.7 (C-4), 69.3 (C-5), 69.0 (C-3), 39.3 (C-6), 38.4 (C-2)。以上数据与文献报道一致[18]，故鉴定化合物7为异绿原酸C。
化合物8：白色粉末。分子式为C26H26O12。1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ: 7.62 (1H, d, J = 15.6 Hz, H-7''), 7.55 (1H, d, J = 15.6 Hz, H-7'), 7.07 (2H, s, H-2', 2''), 6.97 (2H, d, J = 8.4 Hz, H-6', 6''), 6.80 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-5''), 6.78 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-5'), 6.35 (1H, d, J = 15.6 Hz, H-8'), 6.22 (1H, d, J = 15.6 Hz, H-8''), 5.40 (1H, m, H-3), 5.32 (1H, m, H-5), 3.98 (1H, dd, J = 6.6, 3.0 Hz, H-4), 3.69 (3H, s, 8-OCH3), 2.32 (2H, m, H-6), 2.18 (2H, m, H-2)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 175.6 (C-7), 168.8 (C-9''), 168.0 (C-9'), 149.7 (C-4''), 149.5 (C-4'), 147.4 (C-7''), 147.2 (C-7'), 146.9 (C-3''), 146.8 (C-3'), 127.9 (C-1''), 127.6 (C-1'), 123.1 (C-6''), 123.0 (C-6'), 116.6 (C-5''), 116.9 (C-5'), 115.4 (C-2'', 2'), 115.1 (C-8''), 114.8 (C-8'), 74.6 (C-1), 72.2 (C-5), 72.0 (C-3), 69.7 (C-4), 53.0 (8-OCH3), 36.7 (C-2), 35.6 (C-6)。以上数据与文献报道一致[8]，故鉴定化合物8为3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸甲酯。
化合物9：白色粉末。分子式为C25H24O12。1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ: 7.66 (1H, d, J = 16.2 Hz, H-7''), 7.58 (1H, d, J = 16.2 Hz, H-7'), 7.07 (1H, brs, H-2''), 7.06 (1H, brs, H-2'), 6.97 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-6''), 6.96 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-6'), 6.79 (1H, d, J =8.4 Hz, H-5''), 6.78 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-5'), 6.35 (1H, d, J = 16.2 Hz, H-8'), 6.27 (1H, d, J = 16.2 Hz, H-8''), 5.44 (1H, m, H-3), 5.39 (1H, m, H-5), 3.98 (1H, dd, J = 7.2, 3.0 Hz, H-4), 2.32 (1H, dd, J = 13.8, 4.2 Hz, H-6a), 2.23 (2H, m, H-2), 2.17 (1H, dd, J = 13.8, 6.6 Hz, H-6b)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD)δ: 177.4 (C-7), 168.9 (C-9'), 168.4 (C-9''), 149.6 (C-4'), 149.5 (C-4''), 147.3 (C-3'), 147.0 (C-3''), 146.8 (C-7', 7''), 127.9 (C-1'), 127.9 (C-1''), 123.1 (C-6'), 123.0 (C-6''), 116.5 (C-5', 5''), 115.6 (C-8'), 115.2 (C-2'), 115.1 (C-2''), 115.1 (C-8''), 74.7 (C-1), 72.5 (C-3), 72.1 (C-5), 70.6 (C-4), 37.6 (C-2), 36.0 (C-6)。以上数据与文献报道一致[18]，故鉴定化合物9为异绿原酸A。
化合物10：白色粉末。分子式为C26H26O12。1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ: 7.56 (1H, d, J = 15.6 Hz, H-7''), 7.56 (1H, d, J = 15.6 Hz, H-7'), 7.06 (1H, d, J = 1.8 Hz, H-2''), 7.03 (1H, d, J = 1.8 Hz, H-2'), 6.93 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-6''), 6.91 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-6'), 6.75 (2H, d, J = 8.4 Hz, H-5', 5''), 6.30 (1H, d, J = 15.6 Hz, H-8''), 6.18 (1H, d, J = 15.6 Hz, H-8'), 5.55 (1H, m, H-5), 5.12 (1H, dd, J = 8.4, 3.0 Hz, H-4), 4.35 (1H, m, H-3), 3.76 (3H, s, 8-OCH3), 2.35 (1H, dd, J= 15.0, 4.2 Hz, H-6a), 2.19 (1H, m, H-2a), 2.14 (1H, m, H-2b), 2.12 (1H, m, H-6b)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 176.1 (C-7), 168.5 (C-9'), 168.4 (C-9''), 149.6 (C-4'), 149.6 (C-4''), 147.4 (C-7'), 147.4 (C-7''), 146.8 (C-3'), 146.8 (C-3''), 127.7 (C-1'), 127.7 (C-1''), 123.2 (C-6'), 123.1 (C-6''), 116.5 (C-5'), 116.5 (C-5''), 115.2 (C-2'), 115.1 (C-2''), 115.0 (C-8'), 114.9 (C-8''), 75.6 (C-1), 75.2 (C-4), 69.9 (C-5), 66.0 (C-3), 53.0 (8-OCH3), 41. 3 (C-2), 36.8 (C-6)。以上数据与文献报道一致[19]，故鉴定化合物10为1,4-O-二咖啡酰奎宁酸甲酯。
化合物11：白色粉末。分子式为C16H18O9。1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ: 7.56 (1H, d, J = 16.2 Hz, H-7'), 7.05 (1H, brs, H-2'), 6.95 (1H, brd, J = 8.4 Hz, H-6'), 6.78 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-5'), 6.27 (1H, d, J = 16.2 Hz, H-8'), 5.34 (1H, m, H-3), 4.17 (1H, m, H-5), 3.73 (1H, dd, J = 9.0, 3.6 Hz, H-4), 2.20 (2H, m, H-2a, 6a), 2.06 (2H, m, H-2b, 6b)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 177.1 (C-7), 168.7 (C-9'), 149.5 (C-4'), 147.1 (C-7'), 146.8 (C-3'), 127.8 (C-1'), 123.0 (C-6'), 116.5 (C-5'), 115.2 (C-2'), 115.2 (C-8'), 76.2 (C-1), 73.5, (C-3), 72.0 (C-4), 71.3 (C-5), 38.8 (C-6), 38.2 (C-2)。以上数据与文献报道一致[20]，故鉴定化合物11为绿原酸。
化合物12：淡黄色粉末。分子式为C13H12O8。1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ: 7.49 (1H, d, J = 15.6 Hz, H-7), 7.00 (1H, d, J= 1.8 Hz, H-2), 6.91 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-6), 6.74 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-5), 6.18 (1H, d, J = 16.2 Hz, H-8), 5.24 (1H, m, H-2′), 2.16 (2H, m, H-3′)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD)δ: 175.4 (C-9), 168.7 (C-1′, 4′), 149.7 (C-3), 147.2 (C-7), 146.9 (C-4), 127.6 (C-1), 123.0 (C-6), 116.5 (C-5), 115.1 (C-2), 115.0 (C-8), 72.1 (C-2′), 38.0 (C-3′)。以上数据与文献报道一致[21]，故鉴定化合物12为咖啡酰苹果酸。
化合物13：无色针晶（甲醇）。分子式为C10H10O4。1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6)δ: 7.48 (1H, d, J = 15.6 Hz, H-7), 7.05 (1H, d, J= 2.4 Hz, H-2), 6.99 (1H, d, J = 7.8 Hz, H-6), 6.76 (1H, d, J = 7.8 Hz, H-5), 6.27 (1H, d, J = 15.6 Hz, H-8), 3.68 (3H, s, 10-OCH3)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6) δ: 167.1 (C-9), 148.5 (C-4), 145.6 (C-3), 145.2 (C-7), 125.5 (C-1), 121.5 (C-6), 115.8 (C-5), 114.8 (C-2), 113.7 (C-8), 51.2 (-OCH3, C-10)。以上数据与文献报道一致[22]，故鉴定化合物13为咖啡酸甲酯。
化合物14：白色粉末。分子式为C9H8O4。1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6)δ: 7.40 (1H, d, J = 15.6 Hz, H-7), 7.01 (1H, brs, H-2), 6.95 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-6), 6.75 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-5), 6.16 (1H, d, J = 15.6 Hz, H-8)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6)δ: 168.1 (C-9), 148.2 (C-4), 145.6 (C-3), 144.4 (C-7), 125.8 (C-1), 121.6 (C-6), 115.8 (C-8), 115.4 (C-5), 114.6 (C-2)。以上数据与文献报道一致[23]，故鉴定化合物14为反式咖啡酸。
化合物15：黄色粉末。分子式为C23H22O11。1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ: 8.02 (2H, d, J = 9.0 Hz, H-2', 6'), 6.86 (2H, d, J = 9.0 Hz, H-3', 5'), 6.40 (1H, s, H-8), 6.21 (1H, s, H-6), 5.16 (1H, d, J = 7.2 Hz, H-1''), 4.17 (1H, dd, J = 12.0, 1.8 Hz, H-6''a), 4.06 (1H, dd, J = 12.0, 6.0 Hz, H-6''b), 3.35～3.48 (4H, m, H-2''～5''), 1.83 (3H, s, H-7'')；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 179.4 (C-4), 172.5 (C-8''), 166.2 (C-7), 163.0 (C-5), 161.6 (C-4'), 159.4 (C-2), 158.5 (C-9), 135.3 (C-3), 132.3 (C-2', 6'), 122.7 (C-1'), 116.0 (C-3', 5'), 105.6 (C-10), 104.3 (C-1''), 100.0 (C-6), 94.8 (C-8), 77.9 (C-3''), 75.7 (C-2''), 75.5 (C-5''), 71.3 (C-4''), 64.3 (C-6''), 20.5 (C-7'')。以上数据与文献报道一致[24]。故鉴定化合物15为山柰酚-3-O-(6''-O-乙酰基)-β-D-吡喃葡萄糖苷。
化合物16：黄色针状结晶（甲醇）。分子式为C21H20O11。1H-NMR (600 MHz, DMSO-d6)δ: 12.62 (1H, s, 5-OH), 10.89 (1H, brs, 7-OH), 10.20 (1H, brs, 4'-OH), 8.04 (2H, d, J = 9.0 Hz, H-2', 6'), 6.88 (2H, d, J = 9.0 Hz, H-3', 5'), 6.43 (1H, d, J = 1.8 Hz, H-8), 6.21 (1H, d, J = 2.4 Hz, H-6), 5.46 (1H, d, J = 7.2 Hz, H-1'')；13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6) δ: 177.5 (C-4), 164.2 (C-7), 161.3 (C-5), 156.0 (C-4'), 156.4 (C-2), 156.3 (C-9), 133.2 (C-3), 130.9 (C-2', 6'), 120.9 (C-1'), 115.1 (C-3', 5'), 104.0 (C-10), 100.9 (C-1''), 98.7 (C-6), 93.7 (C-8), 77.5 (C-3''), 76.4 (C-5''), 74.3 (C-2''), 69.9 (C-4''), 60.9 (C-6'')。以上数据与文献报道一致[25]，故鉴定化合物16为紫云英苷。
化合物17：白色粉末。分子式为C14H20O6。1H-NMR (600 MHz, CD3OD) δ: 7.25～7.26 (5H, m, H-2～6), 4.30 (1H, d, J = 7.8 Hz, H-1'), 4.09 (2H, m, H-8), 3.86 (1H, dd, J = 12.0, 1.8 Hz, H-6'), 3.76 (1H, dd, J = 15.0, 8.4 Hz, H-3'), 3.66 (1H, dd, J = 12.0, 5.4 Hz, H-5'), 3.35 (1H, m, H-2'), 3.18 (1H, m, H-4'), 2.94 (2H, m, H-7)；13C-NMR (150 MHz, CD3OD) δ: 140.1 (C-1), 130.0 (C-3, 5), 129.3 (C-2, 6), 127.2 (C-4), 104.4 (C-1'), 78.1 (C-3'), 78.0 (C-5'), 75.1 (C-2'), 71.7 (C-4'), 71.6 (C-8), 62.7 (C-6'), 37.2 (C-7)。以上数据与文献报道一致[26]，故鉴定化合物17为2-苯乙基-β-D-吡喃葡萄糖苷。
化合物18：黄色粉末。分子式为C12H24O12。1H NMR (600 MHz, DMSO-d6)δ: 4.90 (1H, d, J = 3.6 Hz, H-1), 4.27 (1H, d, J= 7.8 Hz, H-1'), 3.56 (1H, m, H-2), 3.42 (2H, m, H-6, 6'), 3.40 (2H, m, H-3, 3'), 3.13 (2H, m, H-5, 5'), 3.03 (2H, m, H-4, 4'), 2.89 (1H, t, J = 8.4 Hz, H-2')；13C-NMR (150 MHz, DMSO-d6)δ: 97.0 (C-1), 92.3 (C-1'), 76.8 (C-3', 5'), 74.9 (C-2'), 73.1 (C-3), 72.4 (C-2), 72.0 (C-5), 70.6 (C-4), 70.3 (C-4'), 61.3 (C-6, 6')。以上数据与文献报道一致[27]，故鉴定化合物18为桦褐孔菌二糖。
4 讨论
川西合耳菊为藏医常用的外伤药物，药用历史悠久，临床应用广泛。该植物分布广，资源丰富，但是对该植物化学成分和药理作用的研究报道较少。因此，本研究对川西合耳菊进行了系统的化学成分研究，共分离鉴定了18个化合物，包括9个酚酸类（6～14）、5个倍半萜类（1～5）、2个黄酮类（15、16）、2个其他类型的化合物（17、18）；发现了1个新的倍半萜类化合物（1）；9个化合物（2、4、5、10、12、13、15、17、18）首次从合耳菊属植物中分离得到。本研究进一步明确了川西合耳菊的化学组成信息，为后续药效研究、开发利用、质量评价等奠定了基础。
本研究从川西合耳菊中发现的化合物中，黄酮类成分如紫云英苷以及酚酸类成分如绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸C等均具有较强的抗菌、抗炎、抗病毒等药理作用[28-29]。这些作用与藏药川西合耳菊的清解毒热、愈伤消炎功效相符，为其药效物质。