Agilent 1100方法和序列设置中的小技巧
供参考
做
液相色谱断断续续有8年的历史了,自从买了Agilent 1100,感觉做实验方便得多。无需手动进样,摸好条件后只要设好方法和序列,一点击start,仪器就开始工作了。不只是做样品,还可以包括最后的冲柱子,它都能一次性完成。但是方法或序列设置不当的话,会导致做无用功,全部白做都有可能。下面我来谈谈自己的工作经验和技巧。
1. 摸条件 (以C18柱为例)
可以选单针进样模式,将sample info设置好文件名,比如我做肌苷氯化钠注射液的有关物质,可以在前缀上设jglhn,后面自动生成000,第一针一定要走足够长的时间,我是做化学药的,通常走到主峰保留时间的2倍,看看后面是否有杂质峰出现,要保证针与针之间的数据平行必须做到一针出峰干净后再走第二针。在method里设置必要的参数,比如进样量(20μl)、流动相配比(D泵 0.5%的冰醋酸水溶液)、流速(1.0ml/min)、柱温(35℃)、检测波长(248nm)、保留时间(45min)等,将摸索好的方法用save as method保存到jg1.m。需要说明一点,走单针时文件名自动累加,第一针是000,第二针就自动生成001。
2. 设置序列参数
选择序列进样模式,在sequence parameters中设置好第一针的文件名,还是以肌苷氯化钠注射液为例,在前缀上设jglhn,后面自动生成000,把它改为100与单针区别开,免得覆盖!在sequence table中有几个参数是必须设置的,如方法名和进样次数。而瓶号和样品名称是可以不设置的,也就是说可以让仪器只运行方法而不进样,主要用来冲洗或平衡柱子。一个序列中可以包括多种方法,比如做有关物质自身对照法时,低浓度的样品保留时间可以设得短些,假如21分钟出主峰,我就设到24分钟,方法另存为jg2.m。
假如我做两个批号的样品,进样和冲洗的设置如下:
瓶号 样品名 方法 进样次数
1 ref1 jg2 3
2 sample1 jg1 3
3 ref2 jg2 3
4 sample2 jg1 3
wash1 1
wash2 1
我们可以看到序列中一共包含14个文件,它们的文件名是jglhn100——113。最后两个文件是不需要出报告的,wash1和wash2代表冲洗柱子程序,比如wash1用A泵(水)冲洗,wash2用A泵(水)-B泵(甲醇)(30:70)冲洗。这样一来,人可以离开,仪器会自动完成全过程。需要注意的是:确保充足的流动相!此外,在sequence information中设置关机程序,选择shut off,standby状态即可。需要说明的是,如果中途停止,按stop,再按 start时文件名被覆盖。如果你需要保留原来的文件,可以重新设置第一个文件的编号,比如200。
3. 巧用partial sequence来补针
假如发现有一针结果不理想,需要补进一针或数针,又不想改变原有的序列,就可以用sequence中的partial sequence→run sequence来进行补针。在想要补的文件前面的小方框中打勾,然后运行部分序列即可。
4. 实验中出现机械手突然失灵,进样针指示灯变红怎么办?
有时侯时间做长了,机械手会失灵,停止工作,指示灯变红。我最近就碰到过这个现象,解决办法:先将样品室的开关关掉,数分钟后重新开启,并且将样品瓶转移到机械手相对容易抓到的位置,重新设置一下瓶位号。比如19、20号就是比较难抓的位置,需要往里转很大的角度,21、22就相对容易些。
这些是我从实践中摸索到的一点体会和窍门,也许比较简单一些,希望得到大家的补充。
再补充一点:
不要忘了设置装流动相的体积,如果中途添加了流动相,一定要即时更新。虽然是个小的细节问题,忽略的话会带来大麻烦的!
比如如果实际体积是1000ml,你忘了设置,上回剩余的只有200ml,走一段时间后仪器就自动停止了。而如果情况相反也不行,实际只有200ml,你设了1000ml,会导致空气进入色谱柱,严重时无法恢复。当然这后一种情况很少会遇到,只是提个醒。