原文由 dates(dates) 发表:
用的是安捷伦的毛细管柱子,自己截的以及烧制的窗口,活化步骤是先用0.5M NaOH溶液冲洗10min,超纯水冲洗60min,0.1M HCl溶液冲10min,超纯水冲30min,pH2.5、30mM的磷酸缓冲液冲30min,溶液均过0.2微米的膜,冲洗的过程中基线还不错,但是进样的时候基线的毛刺就挺明显的,想求助各位大神是什么原因呢?
看以前的帖子,建议说清洁检测窗口,想请问一下具体应该怎么清洁呢?跪谢啦~
基线的毛刺有几个方面的原因,请逐一排查:
1。检测窗口不干净。特别是自己烧制的窗口。推荐方法可以用两小块铝箔包住要烧制的窗口两边的位置以保护涂层,中间留出大约2~3mm的空间,然后拿打火机一燎,发现涂层红了就立即拿开打火机。然后用酒精棉或者蘸水的镜头纸擦去烧黑的涂层即可。当然你可以采用电阻丝的方法来烧制窗口。在烧红的电阻丝上面滚一圈就好。也很方便。
2。氘灯能量不足。这个可以通过灯能量测试来考察。表现为基线的波动较大且频繁。
3。缓冲溶液中有气泡。这个可以通过超声,或者在毛细管两端加压的方式解决。
BTW: 毛细管活化的建议步骤:1M NaOH 冲洗10min, 静置10min,水冲洗10min。搞定。根本不需要那么复杂步骤。我从99年开始做电泳,一直都是如此的。