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主题：【求助】单抗加入烷化剂碘乙酰胺后产生沉淀怎么办

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lingyou
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发表于：2015/02/05 11:31:22 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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如题，我做的一个单抗A用碘乙酰胺封闭二硫键，混合后产生了沉淀；用其他的单抗B样品就没事。而且其他的单抗样品B溶于单抗A的溶剂后再加碘乙酰胺也是澄清的。求问这是什么原因，有没有别的烷化剂或者别的合适的方法来封闭二硫键呢
推荐答案：nini2006回复于2015/02/06
也许是你的样品里面含有能够跟碘乙酰胺反应并产生沉淀的物质。你要确定这沉淀物质是不是蛋白质，如果不是就好办，低速离心（建议5000g左右）除掉就可以了。
补充答案：

threetigers107回复于2015/03/02


沉淀前测个蛋白浓度，沉淀后离心再测个蛋白浓度，比较看看是否有明显变化

该帖子作者被版主 nini2006加 5积分， 2经验，加分理由：发帖
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2015/2/6 19:10:55 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
也许是你的样品里面含有能够跟碘乙酰胺反应并产生沉淀的物质。你要确定这沉淀物质是不是蛋白质，如果不是就好办，低速离心（建议5000g左右）除掉就可以了。
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lingyou
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2015/2/10 9:35:42 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 nini2006(nini2006) 发表:
也许是你的样品里面含有能够跟碘乙酰胺反应并产生沉淀的物质。你要确定这沉淀物质是不是蛋白质，如果不是就好办，低速离心（建议5000g左右）除掉就可以了。
你的意思是样品生产过程中引入的某些杂质产生了反应？那如何能够确定是不是蛋白呢？我已经排除了溶剂的干扰，除了溶剂样品里还会有非单抗的物质存在吗
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threetigers107
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2015/3/2 12:50:11 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 lingyou(v2983592) 发表:
你的意思是样品生产过程中引入的某些杂质产生了反应？那如何能够确定是不是蛋白呢？我已经排除了溶剂的干扰，除了溶剂样品里还会有非单抗的物质存在吗

沉淀前测个蛋白浓度，沉淀后离心再测个蛋白浓度，比较看看是否有明显变化
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lingyou
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2015/3/2 14:36:39 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 threetigers107(threetigers107) 发表:

沉淀前测个蛋白浓度，沉淀后离心再测个蛋白浓度，比较看看是否有明显变化
ok,回头试试
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yayicuo
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2018/3/3 18:39:04 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这个方法好，测两次蛋白含量，虽然原理很简单，但确实是很好的一个方法。
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