在这种情况下,可以通过以下方法来建立标准曲线:
一、确定定量关系- 首先要明确,Tween20 经过水解衍生后得到十二烷酸,理论上可以根据化学计量关系确定十二烷酸的量与 Tween20 的量之间的对应关系。
- 假设水解反应是完全的,并且没有其他副反应干扰,可以根据 Tween20 的化学式和水解反应方程式,计算出一定量的 Tween20 完全水解后应该得到的十二烷酸的量。
二、建立标准曲线- 对于已知浓度的三个 Tween20 标准品,虽然在图谱中没有 Tween20 的峰,但是可以通过测定衍生后的十二烷酸的峰面积(或峰高)来建立标准曲线。
- 以十二烷酸的峰面积(或峰高)为纵坐标,对应的 Tween20 的浓度为横坐标,绘制标准曲线。这里要注意,Tween20 的浓度是根据加入的标准品的已知浓度以及前面确定的化学计量关系计算得到的。
- 同时,由于在标准品中添加了十一烷酸内标,可以利用内标法来提高定量的准确性。计算十二烷酸与十一烷酸的峰面积比或者峰高比,以这个比值为纵坐标,对应的 Tween20 的浓度为横坐标,也可以建立另一条标准曲线。
三、定量分析- 对于未知样品,经过同样的水解衍生处理后,测定十二烷酸和十一烷酸的峰面积(或峰高),计算峰面积比或峰高比。
- 根据标准曲线,通过十二烷酸的峰面积(或峰面积比)来确定对应的 Tween20 的浓度。
总之,在这种情况下,可以通过建立十二烷酸的峰面积(或峰面积比)与 Tween20 浓度之间的标准曲线来实现对 Tween20 的定量分析。同时,十一烷酸内标可以帮助提高定量的准确性