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主题：【已应助】牛初乳中igG含量测定

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张婷婷

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发表于：2020/10/24 11:45:54 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

用国标测定牛初乳中igg含量，出现很多问题，希望有经验的前辈给与指导！ 1 空针在保留时间出峰，认为igg与柱子结合没洗脱干净，一直走空针峰面积会变小，但是一直走空针流动相都是盐可能对柱子不好，如何解决？如何更好的洗柱子？2 浓度达到0.54mg/ml出峰后基线回不到零点，上飘，浓度高的没有这种情况，但是基线不回到零点影响积分和后续实验，如何解决？图1是空针图2是色谱图

推荐答案：轶辰回复于2020/10/26

1 空针在保留时间出峰，认为igg与柱子结合没洗脱干净，一直走空针峰面积会变小，但是一直走空针流动相都是盐可能对柱子不好，如何解决？如何更好的洗柱子？
走完序列后走空针清洗流动相，流动相是盐，柱子使用完，用先用高水相冲洗，清洗整个系统的盐，然后用高有机相冲洗。
2 浓度达到0.54mg/ml出峰后基线回不到零点，上飘，浓度高的没有这种情况，但是基线不回到零点影响积分和后续实验。
这个低浓度基线回不到零点，个人觉得是仪器方法的原因或者仪器状态的原因。可以尝试优化下方法

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2020/10/27 11:31:27 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 轶辰(m3191395) 发表: 1 空针在保留时间出峰，认为igg与柱子结合没洗脱干净，一直走空针峰面积会变小，但是一直走空针流动相都是盐可能对柱子不好，如何解决？如何更好的洗柱子？走完序列后走空针清洗流动相，流动相是盐，柱子使用完，用先用高水相冲洗，清洗整个系统的盐，然后用高有机相冲洗。2 浓度达到0.54mg/ml出峰后基线回不到零点，上飘，浓度高的没有这种情况，但是基线不回到零点影响积分和后续实验。这个低浓度基线回不到零点，个人觉得是仪器方法的原因或者仪器状态的原因。可以尝试优化下方法

进样完会用水冲，然后用20%甲醇冲，因为柱子保存条件就是20%有机相不敢用更高比例，试了更改流动相ph，流速，柱温，进样量，都无法解决出峰后基线回不到零点的问题

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