检测 MSI1 对人小细胞肺癌细胞生长增殖的影响

收集 H69、H82、H526、SW1271 的对照组和实验组细胞细胞离心，并用完全培养基调整细胞浓度，H69-NC、H69-shMSI1-1、H69-shMSI1-2、H82-NC、H82-shMSI1-1、

H82-shMSI1-2、H526-NC、H526-shMSI1-1、H526-shMSI1-2 以每孔 1×104 个细胞平铺于 96 孔板中，SW1271-NC、SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2，以每孔 1.3×

104 个细胞平铺于 96 孔板中，37℃ 恒温培养箱中培养。铺板后，分别于 24 h、48 h、72 h、96 h、120h 在每孔加入 10 μL CCK-8 溶液，37℃ 恒温培养箱中孵育 4h。并用酶标仪测定波长 450 nm 处 OD 值，利用 Graphpad prism5 计算增殖情况。

检测 MSI1 对人小细胞肺癌细胞药物敏感性的影响

收集 H69 、H82 、H526 、SW1271 的对照组和实验组细胞，其中 H69-NC 、H69-shMSI1-1、H69-shMSI1-2、H82-NC、H82-shMSI1-1、H82-shMSI1-2、H526-NC、

H526-shMSI1-1、H526-shMSI1-2 细胞系以 1×104 个细胞/孔的细胞密度接种于 96 孔板中，SW1271-NC、SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2 以 1.3×104 个细胞/孔的细

胞密度接种于 96 孔板中。待细胞融合率约 80%，加入不同浓度顺铂。每组均设置对照组及空白组（仅有同体积培养基）。H69、H82、H526 的对照组和实验组加药浓度梯度为 0、1、2、4、8、16、32、64 nmol/mL，SW1271 对照组和实验组细胞加药浓度梯度为 0、2、4、8、16、32、64、128、256 nmol/mL，（加药浓度梯度根据细胞类型、前期预实验结果及细胞对药物的敏感程度而定）。每种浓度设 6 个复孔，每孔总体积为 100 μL，培养 24、48、72、96、120 h 后分别检测细胞活力。每孔加入 10 μL 的 CCK-8

（避光），培养箱中孵育 4 h 后取出，使用酶标仪测定波长为 450 nm 的吸光度（OD 值）。利用公式：抑制率=（加药组－空白组）/（对照组－空白组）计算增殖抑制率。实验重复 3 次，取平均值。以药物浓度为横坐标，细胞增殖抑制率为纵坐标，利用Graphpad prism5 绘图。

敲低 MSI1 对人小细胞肺癌细胞增殖能力的影响

CCK-8 是一种基于 WST-8 而广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速、高灵敏度、无放射性的比色检测试剂盒。WST-8 在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的甲瓒，生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量呈正比，因此可以直接进行细胞增殖和毒性分析。

CCK-8 法测生长曲线实验结果如图 3-1 显示，实验组 H69-shMSI1-1 、

H69-shMSI1-2 、 H82-shMSI1-1 、 H82-shMSI1-2 、 H526-shMSI1-1 、 H526-shMSI1-2 、

SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2 细胞的 OD 值明显低于对照组。表明敲低 MSI1

抑制了 SCLC 细胞的生长增殖。

图 MSI1 低表达对 H69、H82、H526、SW1271 对照组和实验组细胞增殖的抑制情况。应用 Graphpad prism5 作图所示（*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,表示与对照组相比，敲低组 OD 值减小

具有统计学意义）。

测敲低 MSI1 对人小细胞肺癌细胞药物敏感性的影响

药敏实验结果如图 3-2 所示，与对照组相比，实验组 H69-shMSI1-1、H69-shMSI1-2、H82-shMSI1-1、H82-shMSI1-2、H526-shMSI1-1、H526-shMSI1-2、SW1271-shMSI1-1、

SW1271-shMSI1-2 经不同浓度顺铂处理 24、48、72、96、120 h 后细胞的药物敏感性无明显变化。

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主题：【第十五届原创】敲低 MSI1 对小细胞肺癌细胞生长增殖的影响