主题：【原创】玫瑰花水中的香气从哪里来？其组分含量如何测定？

玫瑰花水是玫瑰精油在蒸馏萃取过程中产生的副产物，是一种纯天然产品，包括玫瑰花水（鲜花）、玫瑰花水（盐渍花）和玫瑰鲜花细胞液。玫瑰花水含有微量玫瑰精油成分及其他水溶性成分，香味清淡宜人，具有抗过敏、消炎、抗菌、补充皮肤水分、缓解皮肤衰老、增强皮肤活力等作用。玫瑰花水是开发玫瑰系列食品、化妆品和清新剂等的重要原料，其香气是产品开发利用的重点关注指标，与玫瑰花水产品质量和经济效益正相关。因此，掌握玫瑰花水的特征香气组分及含量对玫瑰花水的合理加工及利用具有重要指导意义。玫瑰花水香气的富集方法有固相微萃取法 、吹扫捕集法、液液萃取法、活性炭吸附法等，但都有其不足之处。

    分散液液微萃取法集萃取及浓缩于一体，具有简单快速、成本低、污染小、富集倍数高等优点，已广泛应用于食品、药物、环境等领域。鉴于此，研究人员采用分散液液微萃取-气相色谱-质谱法（DLLME-GC-MS）分析玫瑰花水的主要香气组分香茅醇、芳樟醇、乙酸香茅酯、甲基丁香酚、苯乙醇、乙酸香叶醇、橙花醇、丁香酚、香叶醇、苯甲醇等，探究并优选出测定玫瑰花水中10种香气组分的最优条件，该方法具有简单快速和高灵敏度等优点，可为玫瑰花水香气的开发利用和产品质量控制提供理论依据。

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试验方法

    取玫瑰花水样品于离心管中，加入含乙腈、二氯甲烷的分散微萃取溶液，涡旋后形成乳浊液体系。超声提取，离心后用微量注射器收集全部下层沉淀相，按照仪器工作条件进行测定。

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结果与讨论

2.1 分散液液微萃取条件的选择

2.1.1 样品量

    试验考察了不同样品量对10种香气组分峰面积总和的影响。结果显示：当玫瑰花水样品量为1.0，3.0mL时，溶液分为两层，分别为上层样品相与下层乙腈相，二氯甲烷与样品未分层，说明乙腈未发挥分散剂作用；取乙腈相上机分析，只检测到香茅醇且响应较低，其他9种香气组分均未检出，说明用乙腈提取目标物效率较低；当样品量为5.0，7.0，9.0，11.0 mL时，二氯甲烷与样品形成稳定的两相体系，上层是样品相，下层是含二氯甲烷的沉淀相，分层界面清晰，且沉淀相中二氯甲烷体积与样品量呈反比，样品量越大，下层沉淀相的二氯甲烷体积越小，目标物浓缩倍数越大，其峰面积总和越高；当样品量不小于9.0mL时，香茅醇质谱峰过载，且沉淀相体积小于20μL，不满足气相色谱 -质谱仪自动进样对样品量的要求（不小于50μL）。综合考虑，试验选择样品量为7.0mL。

2.1.2 氯化钠添加量和超声时间

    适当提高盐度可以有效降低目标物在水溶液中的溶解度，从而提高分散液液微萃取效率，因此试验考察了氯化钠不同添加量对香气组分峰面积总和的影响。结果显示：当氯化钠添加量不大于50mg时，玫瑰花水中 10种香气组分峰面积总和基本一致，没有显著性差异；当氯化钠添加量不小于100mg 时，二氯甲烷与样品没有明显分层，未形成稳定的两相体系。因此，试验选择不添加氯化钠。

    充足的超声时间能够保证目标物的萃取率，但超声时间过长可能导致温度升高，目标物被破坏，萃取率下降。因此，试验考察了不同超声时间对各香气组分峰面积总和的影响。结果显示：在上述超声时间下，10种香气组分峰面积总和呈先升高后降低的趋势，在超声时间为3min时，峰面积总和达到最高，因此试验选择的超声时间为3min。

2.1.3 萃取剂及其用量

    分散液液微萃取中萃取剂需满足密度大于水，与水不互溶，对目标物溶解能力强的要求。试验考察了分别以三氯甲烷、氯苯、四氯化碳、二氯甲烷、甲苯为萃取剂时对玫瑰花水中香气组分峰面积总和的影响。结果显示：以二氯甲烷为萃取剂时，10种香气组分峰面积总和相较三氯甲烷、氯苯、四氯化碳为萃取剂时的高；以甲苯为萃取剂时，甲苯与样品无法形成两相体系。因此，试验选择以二氯甲烷为萃取剂。

    试验进一步考察了萃取剂不同用量对玫瑰花水中10种香气组分峰面积总和的影响。结果显示：萃取剂用量为50，100，150μL时，二氯甲烷与样品未形成稳定的两相体系；萃取剂用量为 200，250μL时，二氯甲烷与样品经离心后分层界面清晰，萃取剂用量为 200μL时提取的10 种香气组分峰面积总和较高。综合考虑富集倍数和萃取剂用量，试验选择二氯甲烷用量为200μL。

2.1.4 分散剂及萃取剂与分散剂的体积比

    分散剂应与萃取剂及水有良好的混溶性，在分相时能形成两相。试验考察了分别以乙腈、甲醇、丙酮为分散剂时对10种香气组分峰面积总和的影响。结果显示：以乙腈作为分散剂时获得的10种香气组分峰面积总和高于以丙酮、甲醇作为分散剂时的。因此，试验选择的分散剂为乙腈。

    试验进一步考察了二氯甲烷和乙腈不同体积比对玫瑰花水中10种香气组分峰面积总和的影响。结果显示：玫瑰花水中10种香气组分峰面积总和在二者体积比为1∶2时最高，因此试验选择的二氯甲烷和乙腈的体积比为1∶2。

2.2 色谱行为

    在优化的试验条件下，混合标准溶液和样品溶液的色谱图见图1
。

    由图1可知，10种香气组分色谱峰峰形较好，分离度高，可满足目标物定量分析要求。

2.3 标准曲线、检出限与测定下限

    以二氯甲烷稀释混合标准储备溶液配制混合标准溶液系列，各目标物的浓度点见表1。按照仪器工作条件测定混合标准溶液系列，以目标物的质量浓度为横坐标，对应的峰面积为纵坐标绘制标准曲线，所得的线性参数见表1。

    以3，10倍信噪比（S/N）计算检出限（3S/N）和测定下限（10S/N），结果见表1。

  由表1可知，10种香气组分的检出限为 0.050~0.078mg·L?1，测定下限为0.166~ 0.261mg·L?1。

2.4 精密度和回收试验

    玫瑰花水的基质是水，考虑到二氯甲烷不溶于水，为了使回收试验结果更加准确可靠，试验采用以无水乙醇配制的混合标准使用液对实际样品进行3个浓度水平的加标回收试验，每个浓度水平平行测定6次，计算回收率和测定值的相对标准偏差（RSD），结果见表2。



    由表2可知：10种香气组分的回收率为79.8%~ 114%，测定值的RSD为2.1%~9.6%，该方法的准确度、精密度符合检测要求。但是，上述试验并未进行方法全流程操作，精密度和准确度结果的适用性有待进一步验证，相关工作将逐渐完善。

2.5 样品分析

    按照试验方法分析玫瑰花水（鲜花）、玫瑰花水（盐渍花）和玫瑰鲜花细胞液这3种样品中10种香气组分，结果见表3。