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【前处理分享】关于样品混匀的探讨
国庆节过后,我们收到上级部门的能力验证样品,两个笋瓜样品,其中一个为空白样品,两个苹果样品,其中一个为空白样品,样品量为200g,取样时,发样人员一再交待,让混匀后再称样品,自己称取平行样。
拿来的能力验证样品均为冷冻样品,我们先化冻,放温水盆里解冻,解冻后采用在混匀器上混匀5min,在超声波里超声10min,然后称取样品25g,按照NY/T761-2008方法进行前处理。
图1:能力验证样品混匀
结果发现笋瓜样品平行性很好,苹果样品平行性不好,询问同行,认为混匀方式应该用均质器混匀,到底是样品混匀方式不对,还是前处理有问题,我做了以下试验。
一、不同的混匀方式 1、 加标
1.1配制标液
标液敌敌畏、甲基对硫磷、异菌脲、氟氯氰菊酯为100ug/mL,用丙酮或正已烷配制为10ug/mL单标。
1.2加入标液
从超市买来苹果,苹果选取的是与能力验证的相近的品种,红牛苹果,破碎装进塑料盒里,每盒里准确称取200g,标注为A1、A2,然后加入敌敌畏2.8mL,甲基对硫磷2.0mL,异菌脲、氟氯氰菊酯2.0mL等。用封口膜将盖子四周粘住,不做任何混匀,直接放冰箱里冷冻。
图2:制作加标样品
2、 混匀方式
2.1 混匀器+超声波超声
把加标过的A1样品放温水盆里解冻,然后在混匀器上5min,放超声波里超声25min,然后用玻璃棒充分搅匀2min,称取平行样品25.0g,按NY/T761-2008方法进行前处理。
图3:混匀器+超声波超声
2.2 匀质器混匀
把加标过的A2样品放温水盆里解冻,然后用匀质器匀浆25min,匀浆时样品粘在刀头上,用干净的玻璃棒刮进样品中,再用玻璃棒充分搅匀2min,称取平行样品25.0g,按NY/T761-2008方法进行前处理。
图4:匀质器混匀
二、测定出现的问题 1、 前处理
1.1 提取出现的问题
用均质器匀浆过的样品,细度比较细,成糊状,在匀浆时粘在刀头上,不容易清洗,在静置分层时,因为含糖量高,样品不分层,需要加入纯水,重新振荡静置,分层时速度很慢,需要由原来的静置时间30min延长到1h,才能彻底分层。
用混匀器+超声波超声的样品,在静置分层时,与匀浆混匀的样品,在颜色上有明显差别,分层速度比较快,30min可以分层。
图5:要延长静置时间
1.2 净化出现的问题
A1两个样品,A2两个样品,按NY/T761-2008方法进行前处理,有机磷类分析步骤为提取与净化,净化需要氮吹近干,但在氮吹过程中有氮吹干的情况,当时没有记录哪个吹干了,直接上机测定。
有机氯类、拟除虫菊酯类分析步骤为提取与净化,净化时先氮吹近干,再过弗罗里析柱,50℃氮吹至小于5mL,再用正已烷定容至5.0mL。
图6:氮吹及氮吹后过小柱净化。
2、 测定结果
敌敌畏的加标量为0.14mg/kg,甲基对硫磷的加标量为0.10mg/kg,异菌脲的加标量为0.10mg/kg,氟氯氰菊酯的加标量为0.10mg/kg。上机时用苹果基质配制浓度与加标浓度一样,用基质配的标液计算样品含量,测定结果见表1。
表1:第一次苹果中农残测定结果(mg/kg)
样品名称 | 敌敌畏 | 甲基对硫磷 | 异菌脲 | 氟氯氰菊酯 |
A1-1 | 0.10 | 0.079 | 0.084 | 0.085 |
A1-2 | 0.12 | 0.078 | 0.080 | 0.082 |
A2-1 | 0.059 | 0.069 | 0.081 | 0.090 |
A2-2 | 0.12 | 0.075 | 0.093 | 0.090 |
图7:混匀器+超声波超声的样品
图8:匀浆机混匀的样品
从上表与图谱可以看出,不论是混匀器+超声波超声还是匀质器混匀,都存在着平行样品不平行的现象,在前处理过程中,氮吹时有氮吹干了情况,但当时没有记录样品号,所以把加标样品拿出来重新测定。
3、 重新测定
重新称取加标样品A1与A2,按上述步骤进行前处理,在氮吹时与同事说话,一不留神吹干了A1-2有机磷样品,只好重新再氮吹,结果见表2.
表2:第二次苹果中农残测定结果(mg/kg)
样品名称 | 敌敌畏 | 甲基对硫磷 | 异菌脲 | 氟氯氰菊酯 |
A1-1 | 0.14 | 0.086 | 0.088 | 0.089 |
A1-2 | 0.071氮吹干了 | 0.049氮吹干了 | 0.084 | 0.091 |
A1-2 | 0.13重做 | 0.080重做 | | |
A2-1 | 0.14 | 0.083 | 0.087 | 0.093 |
A2-2 | 0.14 | 0.088 | 0.090 | 0.096 |
通过表2可以看出,氮吹时对有机磷的结果影响是明显的,如果氮吹时不是近干,而完全干了,测定结果会小一半,回收率减少一半,而有机氯如果第一次氮吹干了,会有影响,但影响不会这么大,回收率也不会减少的这么多,可能与农药本身性质有关。
图9:氮吹干与近干的图谱
三、总结 从以上试验可以得出以下结论:
1、制作加标样品时,可以用高浓度标液,这样加标体积较小,不会影响到样品质量,但要充分混匀,让农药充分渗透到样品里,比如苹果样品比较粘稠,如果加了100-200uL标液,标液只会停留在样品表面某个点上,此时直接用匀浆机混匀,这个标液点就直接粘在刀头上,无法洗脱,也达不到混匀效果,会造成样品的不平行,像这种粘稠样品,有没有快速混匀的方法,希望高手们提供一些供参考。
2、样品混匀不论哪种方式,要有足够的时间,30min后应该可以混匀,称样前还需要用玻璃棒不停搅拌5min,再次混匀样品。
3、苹果样品如果用匀浆机混匀,前处理时还有匀浆的步骤,这时样品细度比较细,过滤静置时,液体比较混浊,需要加水或加氯化钠,还需要延长静置时间,才能彻底分层。
4、平行样品不平行,相差一半时,有很大可能是前处理过程出现问题,农药的性质不同,结果也不同,比如敌敌畏与甲基对硫磷的沸点不同,敌敌畏沸点74℃,甲基对硫磷的
沸点158℃,氮吹时水浴温度80℃,如果氮吹完全干,甲基对硫磷的回收率有70%以上,而敌敌畏的回收率只有50%,;其它如异菌脲、氟氯氰菊酯等农残,因为沸点和分子结构不同,损失没有敌敌畏的损失大。