第七课
液相色谱仪气相色谱法是一种很好的分离、分析方法,它具有分析速度快、分离效能好和灵敏度高等优点。但是
气相色谱仅能分析在操作温度下能汽化而不分解的物质。据估计,在已知化合物中能直接进行
气相色谱分析的化合物约占15%,加上制成衍生物的化合物,也不过20%左右。对于高沸点化合物;难挥发及热不稳定的化合物、离子型化合物及高聚物等,很难用
气相色谱法分析。为解决这个问题,70年代初发展了高效
液相色谱。高效
液相色谱的原理与经典
液相色谱相同,但是它采用了高效色谱拄、高压泵和高灵敏度检测器。因此,高效
液相色谱的分离效率、分析速度和灵敏度大大提高。就其分离机理的不同,高效
液相色谱可以分为液-固吸附色谱、液-液分配色谱、离子交换色谱和凝胶渗透色谱四类。液—固色谱的色谱柱内填充固体吸附剂,由于不同组分具有不同的吸附能力,因此,流动相带着被测组分经过色谱柱时,各组分被分开。液—液色谱的流动相和固定相都是液体。作为固定相的液体涂在惰性担体上,流动相与固定液不互溶。当带有被测组分的流动相进入色谱柱时,组分在两相间很快达分配平衡,由于各组分在两相间分配系数不同而彼此分离。以非极性溶液作流动相,极性物质作固定相的液—液色谱叫正相色谱;极性溶液作流动相,非极性物质作固定相的液—液色谱叫反相色谱。离子交换色谱的色谱柱内填充离子交换树脂,依靠样品离子交换能力的差别实现分离。而凝胶色谱是按试样中分子大小的不同来进行分离的。在上述四类色谱中,应用最广泛的是液—液色谱,因此,在本节的讨论中以液—液色谱为主。高效
液相色谱的基本理论和定性定量分析方法与
气相色谱基本相同。高效
液相色谱仪由输液系统、进样系统、分离系统、检测系统和数据处理系统组成。
第八课
液相色谱仪-输液系统输液系统高效
液相色谱的输液系统包括流动相贮存器、高压泵和梯度淋洗装置。流动相贮存器为不锈钢或玻璃制成的容器,可以贮存不同的流动相。高压泵是高效
液相色谱仪最重要的部件之一。由于高效
液相色谱仪所用色谱柱直径细,固定相粒度小,流动相阻力大,因此,必须借助于高压泵使流动相以较快的速度流过色谱这。高压泵需要满足以下条件:能提供150-450kg/cm2的压强;流速稳定,流量可以调节;耐腐蚀。目前所用的高压泵有机械泵和气动放大泵两种。梯度淋洗装置可以将两种或两种以上的不同极性溶剂,按一定程序连续改变组成,以达到提高分离效果,缩短分离时间的目的。它的作用与
气相色谱中的程序升温装置类似。梯度淋洗装置分为两类:一类叫外梯度装置;一类内梯度装置。外梯度装置是流动相在常压下混合,靠一台高压泵压至色谱柱;内梯度装置是先将溶剂分别增压后,再由泵按程序压入混合室,再注入色谱柱。
第九课
液相色谱仪-进样系统,分离系统进样系统一般高效
液相色谱多采用六通阀进样。先由注射器将样品常压下注入样品环。然后切换阀门到进样位置,由高压泵输送的流动相将样品送人色谱柱。样品环的容积是固定的,因此进样重复性好。分离系统分离系统包括色谱柱、连接管、恒温器等。色谱柱是高效
液相色谱仪的心脏。它是由内部抛光的不锈钢管制成,一般长10—50cm,内径2—5mm,柱内装有固定相。
液相色谱的固定相是将固定该涂在担体上而成。担体有两类:一类是表面多孔型担体;另一类是全多孔型担体。近年来又出现了全多孔型微粒担体。这种担体检度为5—10um,是由nm级的硅胶微粒堆积而成,又叫堆积硅珠。由于颗粒小,所以柱效高,是目前最广泛使用的一种担体。在高效
液相色谱分析中,适当提高柱温可改善传质,提高桂效,缩短分析时间。因此,在分析时可以采用带有恒温加热系统的金属夹套来保持色谱拄的温度。温度可以在室温到60℃间调节。