主题：【求助】造成色谱峰分叉的原因有那些

[在使用BDS柱时加磷酸对柱子有何影响

在使用BDS柱时加磷酸对柱子有何影响

在使用BDS柱时加磷酸对柱子有何影响

如果是每个峰都分叉，主要问题在于柱子中间有断层。
造成断层的原因是柱子还在高压（只要是高于大气压）时进口端压力突然降低，使柱出口端压力高于柱进口端（正常时永远是进口端压力高于出口端），反冲的压力使填料移向柱进口端（使用一段时间的柱子或填充不紧密的柱子，柱进口端都会有塌陷造成的空间），柱中间就会出现断层。
解决的方法是将柱子反接，加高压一段时间，再将柱子正接，从低压慢慢升到高压。再一种方法就是在柱子正接情况下升高压力保持一段时间，这种方法恢复比较慢。

换个新柱子作个对比看看，就知道是不是柱子的原因了。
其他还有移动相不合适或者样品浓度过高。一般柱子的可能性大些。

赌东道赌东道赌东道的

原文由 septyaya 发表:
如题，最近我的HPLC出现峰分岔，但总是找不到问题的根源，求助！

问题要一步一步解决：
1 查看色谱条件是否适宜、是否在原条件基础上变更
2 全面清洗在线过滤器、滤头等，排除机器干扰
3 排除预柱干扰
4 排除色谱柱干扰

原文由 zzghy 发表:
也有可能是流动相配制的问题,或者时间久了.
还有是否用流动相当溶剂去溶解样品,单用有机溶剂溶样也有出现分岔峰.
建议重配一次或配制不同比例的流动相试一试.

我是做甲醛的，用的乙腈溶解甲醛衍生物，样品溶液中有40%乙腈，50%样品，水和衍生剂各5%。

原文由 sunchun2008 发表:
如果是每个峰都分叉，主要问题在于柱子中间有断层。
造成断层的原因是柱子还在高压（只要是高于大气压）时进口端压力突然降低，使柱出口端压力高于柱进口端（正常时永远是进口端压力高于出口端），反冲的压力使填料移向柱进口端（使用一段时间的柱子或填充不紧密的柱子，柱进口端都会有塌陷造成的空间），柱中间就会出现断层。
解决的方法是将柱子反接，加高压一段时间，再将柱子正接，从低压慢慢升到高压。再一种方法就是在柱子正接情况下升高压力保持一段时间，这种方法恢复比较慢。

就衍生剂峰分叉，样品峰不分叉，这事怪了

HPLC分析中，在色谱柱正常，样品灵敏度足够，分析方法合适，色谱峰在出峰时间较短的条件下（不包括梯度），峰型应对称而尖锐。但是，在对样品了解程度不够，方法不妥，样品处理方法及进样方式不合理下，会出现各种意想不到的问题，而对色谱峰难以作出合理的解释，尤其对于新手更是如此。下面根据本人几年工作的体会，提出一些看法，向同仁指教。
色谱双峰指的是明是一种物质，但在色谱图中出现双峰，而表明含二种物质。我将这种情况分为四种原因。
1 色谱柱 如果你分析样品时发现每个色谱峰都双峰出现（出峰越快，双峰的可能性会减少），尤其采用单一纯物质时，可以肯定色谱柱出问题－柱头受损或柱头固定相变脏或流失。如果进样量少，原来色谱柱正常，色谱峰的形状多为一大峰带一小峰，不一定拖尾，这一般应是柱头受堵，将色谱柱反过来接，用流动相冲洗或酸洗或其它溶剂，将堵在柱头的残留物冲掉，再反过来，一般情况下就行了。当然不反冲，正冲有时也会正常的。如果峰拖尾，双峰强弱相差不大，柱头固定相变脏或流失可能性更大，这是可以将进样那头拧开，将微孔滤片超声，柱头刮去一部分填料，重新填上新填料拧紧，不过这种活，需要一定技术，同时不能老干那种事，否则用不了几次，色谱柱就会应柱效很低而报废。
2 溶剂极性及进样量 许多HPLC分析者对此可能不以为然，一般的HPLC的书籍和文献都不会提到这方面的内容，而这确是双峰产生的一个很重要的原因。目前HPLC分析多为反相色谱，流动相多为甲醇、乙腈、水，加各种添加剂以改善分离性能。样品一般用与流动相相溶的溶剂溶解。最佳的溶解方法是用流动相溶解，但是很多情况是不一致的。当用溶剂极性强度大的试剂，如纯甲醇、纯乙腈，纯乙醇，而分析体系中以水为主，样品进样量大，如定量管为20ul，此条件下完全可以肯定，单一的纯物质出双峰，第二峰比第一峰小（每次都不太一样），且拖尾，保留时间会提前(相对进样量少而言)，将进样量减少一半以上，峰型将变为正常。这是样品的溶剂与流动相极性相差太大，而流动相来不及将其稀释达到平衡造成的。上面提到进样量造成双峰的一个原因，另一个原因是，进样量不一定大，但绝对量很大，色谱图上的双峰紧靠在一起，基本上齐高，不拖尾（如果出峰很快，也可能是色谱柱问题）。将样品稀释再进样就可以了，这是由于进样量过大，色谱柱过载造成的。
3 样品的特性 有些样品由于其化学结构的特点，存在互变异构现象，而这种互变异构体无法分开，而是以一个动态平衡存在。在色谱分析时，在一个特定的条件下，一种物质将出现双峰，双峰靠的很近，基本齐高，不拖尾，条件稍一变化，尤其pH，双峰现象将消失，如红霉素等。有的样品紫外的色谱图上看不到双峰，但在LC－MS下，用质谱检测器，其质谱的总离子流图上较明显，例如我分析过的农药啶虫眯（吡虫清）。
4 参数 记录的参数一般都内定的，不必修改，但GC和HPLC的参数是不完全一致的，例如C－R3A数据记录仪上的一般记录时间间隔GC为2ms，HPLC 为5ms，如果记录间隔时间缩短，一个峰将变为二个峰或更多。