主题：【原创】关于分光光度计基线校正的原理和方法

原文由 weimiya(weimiya) 发表:
还有一个问题请教老师，我最近在做紫外，样品溶液是鱼肝脏上清液，空白调零是在缓冲溶液中加入样品溶液，可是在调零的过程中，总是无法稳定调零，但是蒸馏水就可以，出现这种情况是什么原因呢？谢谢老师了

原文由 夕阳(anping) 发表:

原文由 weimiya(weimiya) 发表:
还有一个问题请教老师，我最近在做紫外，样品溶液是鱼肝脏上清液，空白调零是在缓冲溶液中加入样品溶液，可是在调零的过程中，总是无法稳定调零，但是蒸馏水就可以，出现这种情况是什么原因呢？谢谢老师了

试着回答上面版友的问题如下：

（1）一般配成的样品溶液的成分是：溶剂+溶质=混合液。在这里溶剂一般是一种或多种试剂组成；而溶质一般是指待测的物质。

（2）仪器调零（或基线校正）一般是用溶剂分别放置在样品仓里的样品池架和参比池架中来完成的。

（3）上面这位版友阐述的调零方法是“空白调零是在缓冲液中加入样品溶液”。这很令人费解。缓冲液指的是什么？如果是我所说的溶剂的话，那么为何还要加入样品溶液？这不就是成为了待测的混合液了吗？既然仪器是来检测混合液的，那为何还要用该溶液来调零呢？既然已经用了待测的混合液来作为空白零点扣除了，那还测试什么呢？测试还有意义吗？

（4）蒸馏水调零稳定，而用混合液调零不稳；这现象正说明你的溶液的吸光值很高，已经远远超出了仪器的动态放大范围了，造成了仪器放大器的饱和。据此，我主观地推测，这位版友使用的测试波长范围在紫外区，并且使用的仪器是中低档的吧？

原文由 weimiya(weimiya) 发表:

原文由 夕阳(anping) 发表:

原文由 weimiya(weimiya) 发表:
还有一个问题请教老师，我最近在做紫外，样品溶液是鱼肝脏上清液，空白调零是在缓冲溶液中加入样品溶液，可是在调零的过程中，总是无法稳定调零，但是蒸馏水就可以，出现这种情况是什么原因呢？谢谢老师了

试着回答上面版友的问题如下：

（1）一般配成的样品溶液的成分是：溶剂+溶质=混合液。在这里溶剂一般是一种或多种试剂组成；而溶质一般是指待测的物质。

（2）仪器调零（或基线校正）一般是用溶剂分别放置在样品仓里的样品池架和参比池架中来完成的。

（3）上面这位版友阐述的调零方法是“空白调零是在缓冲液中加入样品溶液”。这很令人费解。缓冲液指的是什么？如果是我所说的溶剂的话，那么为何还要加入样品溶液？这不就是成为了待测的混合液了吗？既然仪器是来检测混合液的，那为何还要用该溶液来调零呢？既然已经用了待测的混合液来作为空白零点扣除了，那还测试什么呢？测试还有意义吗？

（4）蒸馏水调零稳定，而用混合液调零不稳；这现象正说明你的溶液的吸光值很高，已经远远超出了仪器的动态放大范围了，造成了仪器放大器的饱和。据此，我主观地推测，这位版友使用的测试波长范围在紫外区，并且使用的仪器是中低档的吧？

因为我测的是鱼肝脏的过氧化氢酶的活性，样品是肝脏上清液，在紫外区，空白调零的缓冲液是磷酸溶液，样品测定的缓冲溶液是过氧化氢-磷酸溶液，所以就是这个样子，仪器是几万块的紫外可见分光光度计，不知道是不是仪器本身在紫外区就不稳定造成的还是其他的什么原因？谢谢老师

原文由 qianguiyun1(qianguiyun1) 发表:
请教安老师，仪器的预热时间多少合适？

原文由 夕阳(anping) 发表:
这个预热时间没有一个固定的规定，这要依据仪器的性能而定。所谓的预热一般主要是一个针对光源的稳定平衡的过程。在光源里，氘灯的稳定时间要长于钨灯。所以预热的时间主要是看氘灯的性能了。氘灯较新，预热时间则可短一些，反之则要长一些。那么如何判断光源是否稳定了呢？唯一的可靠的办法就是看看仪器的静态基线平坦度便知了。我的的经验每1~2个月做一次仪器的基线平坦度；具体方法：仪器开机后，每隔10分钟做一次做一次基线，以平坦度最佳的时间段为预热最佳时间。