九、培养基的品质
1. 外观
颜色、粉末细度须均匀。
2. 溶解性
培养基完全溶解,可以避免培养基内营养成分的流失。
3. pH值
哺乳类动物细胞生长需要合适的酸碱度,同时pH值的测定也可以检查培养基的批间差异。
4. 水分
培养基的营养成份很丰富,利于微生物的滋长,因此水分的含量控制可以延长有效期。
5. 冰点渗透压
细胞必须生活在合适的渗透压环境中;同时渗透压值的测定也可以检查培养基的批间差异。
6. 菌落总数
粉末培养基不是无菌制剂,培养基本身的营养成分很丰富,容易滋生微生物,因此菌落的控制可以延长有效期
7. 细胞生长试验
可检查细胞培养基是否有促生长的能力,以及是否有不利细胞生长的毒素。
8. 细菌内毒素
为满足生物制品细菌内毒素的控制要求,作为生物制品生产原料的培养基同样需要细菌内毒素控制。
9. 稳定性
确定产品的储存、运输条件,产品的保质期限。
10. 一致性
验证产品的均一性。
十、常见问题解答
1. 如何选用培养基?
选择培养基没有一定标准,有几点建议可供参考:
(1) 建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞首选的培养基。可以查阅文献,或在购买细胞株时咨询。
(2) 本单位惯用的培养基不妨一试,许多培养基可以适合多种细胞。
(3) 根据细胞株的特点、实验的需要来选择培养基。如小鼠细胞株多选1640;进行细胞杂交、基因转移实验,可选择IMDM。
(4) 用多种培养基培养目的细胞,观察其生长状态,可以用生长曲线、集落形成率等指标判断,根据实验结果选择最佳培养基,这是最客观的方法,但比较繁琐。
2. 选择便宜的培养基品种成本就低吗?
(1) 通常,培养基可以适合多种细胞,细胞也可以在不同培养液中生长;例如在MEM中培养的细胞,很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。
(2) 培养基养份不同会导致细胞生长效果不同,病毒或蛋白表达不同,应该选择效果最好的培养基,考虑生物制品的综合成本;
(3) 最终目的是追求生物制品的得率——得率高则成本低。
3. L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗?它在溶液中不稳定吗?
L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的,脱掉氨基后, L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源,参与蛋白质的合成和核酸代谢。 但L-谷氨酰胺在溶液中不稳定,在高温下会分解成吡咯烷酮和羧酸,也有一些毒降解产物如NH4+会不可逆转地损坏细胞壁。
L-谷氨酰胺在不同温度、不同pH值条件下的稳定性研究如下。