原文由 biming(biming) 发表:
其实我很抱歉,我的基础学得不好。最近在学气质联用的数据处理问题时,碰到了内标法。
其实我知道什么是内标法,不过带我的那个导师说我们用的是内标标准曲线法,跟内标法有区别,我搞糊涂了,想不懂它们有什么不同,请大家赐教。
不知道你要测哪类型的物质呢?我做有机氯农药残留的,说说我们内标法怎么搞的吧。
首先选择内标:所有涉及的化合物的GC-MS准确定量都以内标为对比标准。假设内标为A,浓度为100ppb--注意这个浓度必须配得非常准,因为下面所有物质的定量都是始于与内标对比的。
假设你要检测样品中的B、C、D、E、F五个化合物。你先配制这五个化合物的混合标准溶液。混合标准溶液有现成的卖,也可以分别买了B、C、D、E、F的标准品再配成混合溶液。如果是现成的标准溶液,浓度一般很高。可去一点出来配成低浓度的,比如200ppb。这个200ppb进一步稀释成100、50、20、10ppb几个浓度。好,这就有了含有B、C、D、E、F五个目标物的一个浓度梯度的混合溶液。但这些配出来的浓度梯度还不是十分可靠的。接下来需要往每个混标里头加入内标A。在GC-MS中,BCEDF的信号强度与A对比=浓度比,A浓度为100ppb,算出200ppbBCDEF混合标准溶液中B的实际浓度可能是199.9,C可能是199.8,EDF(略)。同样可以计算出100、50、20、10ppb标准溶液中BCDEF各自的实际浓度。
经过上述过程就得到了200、100、50、20、10ppb的混合溶液中B的实际浓度,假设为200.1、99.9、49.8、19.9、10.0,各个浓度在仪器上的响应强度为Q1、Q2、Q3、Q4、Q5。以浓度为横坐标、响应强度为纵坐标,拟合各点即得标准曲线。当检测样品时,知道样品中A的响应强度为Q,仪器就从标准曲线查出该强度对应的浓度。
OK了?未~其实,样品上机测试前还得加入已知浓度及体积的内标A(即加内标啦)。这样就能知道样品中B的响应值与A的响应值的对比。而标准曲线上纵坐标实际上是标准溶液中A的强度与B的强度的比值。A的作用就相当于一把有刻度的尺子,量一量样品中B,再去标准曲线那边量一量。啊,原来样品中的B浓度是xxx
(以上就是我的理解,我接触GC-MS也不是很长。有些细节我上面没提,一方面我也没搞懂,另一方也怕说多了反而复杂。请更有水平的同志指正。)