主题：【求助】关于DNA合成及OPC纯化

难得分析论坛里有做DNA合成的
DNA合成原理：现在已经发展出来的oligo DNA的化学合成方法有：磷酸二酯法，磷酸三酯法，亚磷酸三酯法，固相合成法，自动化法等。目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。亚磷酰胺三酯法合成DNA片段，具有高效、快速偶联以及起始反应物比较稳定的特点。该方法是在固相载体上完成DNA链的合成的，合成的方向是沿待合成引物的3‘端向5‘端合成，相邻的核苷酸通过3‘→5‘磷酸二酯键连接。
    第一步 脱保护作用：三氯乙酸（TCA）处理，脱去预先连接在固相载体（CPG）上核苷酸5’-OH的保护基团DMT，获得游离的5’-OH；
    第二步 偶联反应：合成DNA的原料（亚磷酰胺保护的核苷酸单体）与活化剂四唑混合，得到核苷亚磷酸活化中间体，它的3’端被活化，5’-OH仍然被DMT保护，与溶液中游离的5’-OH发生缩合反应；
　  第三步 带帽(capping)反应:缩合反应中可能有极少数5’-OH没有参加反应(少于2%)，用乙酸酐(AC)和N-甲基咪唑终止其后继续发生反应，这种短片段可以在纯化时分离掉；
    第四步 氧化作用：在氧化剂碘的作用下，亚磷酰形式转变为更稳定的磷酸三酯。
经过以上四个步骤，一个脱氧核苷酸被连接到固相载体的核苷酸上。再以三氯乙酸脱去它的5’-OH的保护基团DMT，重复以上步骤，直到所有要求合成的碱基被接上去。合成过程中可以观察TCA处理阶段的颜色判定合成效率。通过氨水高温处理，连接在CPG上的引物被切下来，通过OPC, PAGE等手段纯化引物，成品引物用C18浓缩、脱盐，测定OD260定量
OPC纯化： OPC纯化是根据DNA保护基（DMTr基）和Cartridge柱中树脂间的亲合力作用的原理进行纯化目的DNA片段。OPC法纯化的DNA纯度大于95%（个资料提供的数值并不均一）。适用于40mer以下引物的纯化
想必这些楼主现在对DNA合成与纯化这块了解应该都很多了吧。

我也是刚刚接触这行不久的，希望以后有机会交流学习