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液相色谱（LC）
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主题：【求助】关于高效液相色谱保留时间的问题

浏览0 回复8 电梯直达
淮河木头
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发表于：2010/05/14 13:51:40 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这几天在做一个品种中绿原酸和黄芩苷含量测定，

1.仪器：

岛津LC-20AT单元泵、

SPD-M20A二极管阵列检测器、

SIL-20A自动进样系统、

DGU-20A5在线脱气系统、

CTO-20A柱温箱、

LC-Solution色谱工作站

2.色谱条件：

色谱柱：Inertsil ODS-SP(4.6mm×250mm，5μm)；

流动相：甲醇(A)-0.2%磷酸(B)-乙腈(C)三元梯度系统，

采用梯度洗脱：

0→15min，85%→45%B，5%C；

15→25min，45%B，5%C；

25→30min，45%→85%B，5%C；

检测波长：全波长扫描

柱温：30℃；

流速：1.0ml/min；

进样量：10μl

3.实验中出现的问题：

需要测定的成分绿原酸和黄芩苷（混合对照品溶液），能够很好的分离，但是每一针对照品的出峰时间不一样。比如说我第一针进样，两成分能够很好的分离，但是第一针采样结束后，进第二针时，绿原酸在第一针出峰的位置没有色谱峰，黄芩苷有色谱峰。进样品的时候也是这个样子，一会有色谱峰，一会又没有色谱峰，而且两个成分的保留时间差别也较大。




第一针对照品峰



第二针对照品（与第一针是同一份对照品）



供试品色谱图



供试品色谱图



供试品色谱图

（前两针是对照品，后三针是样品，样品是不同批号的，但是均含绿原酸和黄芩苷）
下面针就看不到绿原酸峰了，不晓得出哪里了！


请朋友们帮忙分析一下原因，未详细叙述的地方会根据朋友们的回复，跟帖说明，谢谢大家了！
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老多_小多
emoc98311
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2010/5/14 16:23:56 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
楼主有进单一标准吗？
绿原酸的响应有那么低吗？你确定那个峰就是？如果是，这样看好象是看不出问题来，因为你另外一个组分又正常
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xyhdcm2002
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2010/5/18 14:40:31 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
测过流速吗？如果流速正常，那就是你的流动相里有大量汽泡存在！！
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淮河木头
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2010/5/19 9:38:25 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 老多_小多(emoc98311) 发表:
楼主有进单一标准吗？
绿原酸的响应有那么低吗？你确定那个峰就是？如果是，这样看好象是看不出问题来，因为你另外一个组分又正常


图1和2就是对照品

进单标和混标，我试了，基本都是这样的图，我增加绿原酸的进样量，绿原酸色谱峰，还是不能够稳定出峰！
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淮河木头
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2010/5/19 9:41:06 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 xyhdcm2002(xyhdcm2002) 发表:
测过流速吗？如果流速正常，那就是你的流动相里有大量汽泡存在！！


首先，流速没有测过，是用什么来测定流速呀？

其次，我的仪器是在线脱气的，磷酸在上仪器之前也是经过超声脱气的，这个大量气泡哪里来的呢？
（仪器显示脱气压力为负91Kpa）
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淮河木头
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2010/5/19 9:44:01 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 老多_小多(emoc98311) 发表:
楼主有进单一标准吗？
绿原酸的响应有那么低吗？你确定那个峰就是？如果是，这样看好象是看不出问题来，因为你另外一个组分又正常


至于峰的确定问题，因为我的检测器是全波长扫描的，可以提取光谱图的，可以通过光谱图来确定是所需要的主峰！
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guangcai1980
guangcai1980
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2010/5/19 9:57:15 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
很可能与你的流动相有关，试着应用二元梯度不可以吗？
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淮河木头
goog001
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2010/5/19 17:30:24 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 guangcai1980(guangcai1980) 发表:
很可能与你的流动相有关，试着应用二元梯度不可以吗？


去掉乙腈，用二元梯度，结果上述一样，不是这个原因！
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xyhdcm2002
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2010/5/28 11:34:58 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
出峰时间偏差大吗？如果在0.2以内，那么算正常，如果偏差大的话，那就可能是你的单向阀有问题！！
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