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液相色谱（LC）

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主题：【求助】液相检测，柱子问题？

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lwjxzj

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发表于：2010/06/19 10:33:47 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

近做一个分子量在70KD左右的糖蛋白，
用色谱柱的型号是TSK G2000 SWXL,7.8*300mm)

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2010/6/19 10:44:53 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

样品和对照品的溶剂都一样吗，都是用流动相溶解的？是不是样品溶液对PH的影响比较大或样品中存在与主成分保留时间相似的物质。

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lwjxzj

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2010/6/19 12:08:55 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
样品和对照品的溶剂都一样吗，都是用流动相溶解的？是不是样品溶液对PH的影响比较大或样品中存在与主成分保留时间相似的物质。

样品和对照品的溶剂都一样的，和流动相成分一样,

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2010/6/24 11:38:19 Last edit by lwjxzj

xue2009

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2010/6/19 15:09:08 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

很有可能是样品的PH值没有调节正确，对照品出峰正常说明柱子没问题

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有水有渝

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2010/6/20 21:15:37 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

换几个ＰＨ看看，当然不要超出色谱柱的使用范围，色谱柱的维护说明书中肯定有说明，如果没有还是咨询厂家色谱柱工程师为好。

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〓猪哥哥〓

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2010/6/21 8:09:02 地板管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

对照品存放时间是否过长？流动相重新配置再进样查看下

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tigertooth

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2010/6/21 10:51:22 6楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

TSK sw系列的柱子适合蛋白质的分离，你的样品为糖蛋白，既有蛋白又有糖的性质，所以分离不好，蛋白肯定没问题。这其实与用PW分离蛋白是一样的，都会有拖尾。所以你只能改变流动相试一试。

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孟

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2010/6/22 15:15:02 7楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

稍微的改变下流动相，也可以考虑减少进样体积，进5ul试试看。

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igudukyve

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2010/6/23 16:51:34 8楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

先咨询厂家看看了，柱子是没有问题，可能得调整一下PH值。

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yankunsu

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2010/6/23 18:21:47 9楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

1、减少进样量
2、略微调整一下PH，你的样品的PKa是4.5--5.5。可调PH为8.0试试

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zhyg2009

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2010/6/23 20:58:16 10楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

通过对照品色谱峰，可以确定你的柱子应该没问题；上样过大会拖尾，但我觉得这主要与你的流动相pH值有关。样品在不适宜的pH值环境下易解离会造成严重拖尾。所以你应该多查一下与你样品蛋白相似蛋白的色谱流动相pH值条件。

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