主题:【第三届原创参赛】液相,爱你!——记一次假阳性的验证(更新后)

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风肃
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        本文为作者zhufengdr原创,若需转载请直接先与本人取得联系,经双方协商并签定遵守相关协议后才可转载。未经本站作者授权自行转载的,属侵权违法行为。
     
        本文是针对某目标物假阳性检出做的验证过程,先介绍个大概流程吧:样品稀释后(稀释前浓度较高,保留时间偏差约0.04分钟)经过GC-MS检测发现保留时间和谱库检索皆符合目标物,但是考虑该目标物有较多异构体,故采用液相验证!通过分析标准样品、加标样品、稀释后样品,保留时间和吸收都符合,最终通过光谱来确证了,为假阳性!

关键词:GC/MS,HPLC(DAD),稀释、加标,紫外可见吸收光谱


    样品Fullscan(图1-11.833分钟,与标准溶液相比,该离子出峰时间差约0.04分钟,而且质谱谱库检索对照特征离子及其丰度比定性,与目标物几乎一致,质谱图与谱库检索最匹配结果对比如图2

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1样品Fullscan


2 11.833分钟峰的质谱图与谱库检索最匹配结果对比

样品SIM(图34-11.836min

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3 样品SIM

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                                          图4 样品SIM放大图
标准样品SIM(图5):

baseline


5 不同浓度标准样品SIM



    怀疑是浓度高引起时间漂移,如果是这种物质的话,初步定量为144ppm,故稀释15倍(0.1ml->1.5ml)大约为10ppm,定量SIM(图6、7),保留时间与20ppm标准物质一模一样

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图6 样品稀释至约10ppmSIM

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                                图7 样品稀释至约10ppmSIM放大图

    再次将样品溶液稀释至5ppm,以及另配加标样品(同浓度加标),同时进样标准溶液5ppm,,先经过GC-MS测定,如图8,发现只有一个峰,且与标准物质出峰时间一样!
                                      图8 加标后GC-MS SIM




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                                      图9 HPLC/DAD分析

    经过高效液相分析发现(图9),保留时间非常相近,加标后的丰度变化两者综合考虑,应该就是阳性了!从第三点考虑出发,也是关键的一步:紫外-可见吸收光谱对比(图10)。

    根据建立的谱库,样品溶液的4.806分钟峰从峰起始至峰结尾都是同一个光谱图,说明峰纯度高,应该为单一物质,其与标准样品光谱图的特征吸收峰不同。而且加标后的样品从峰起始至峰结束的光谱图时变化的,从以上光谱分析可知,为该出峰物质非目标物质,GC-MS为假阳性检出。


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                                                                                                                            图10 UV-Vis对比
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老多_小多
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通常都是色谱做的用质谱来验证,楼主反过来的做法好像很少
风肃
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原文由 老多_小多(emoc98311) 发表:
通常都是色谱做的用质谱来验证,楼主反过来的做法好像很少


标准采用气质液相两种方法做,而实际中气质效率高很多,所以通常采用气质来做定性定量,但又受限于异构体的分离难度,且日常发现异构体间特征离子及其丰度比都在要求范围内,所以遇有异构体时,采用液相来确证!
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2010/7/28 22:42:30 Last edit by zhufengdr
frappuccino
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楼主这是在干嘛? 第一次遇见这种事情吗?
你觉得有意义吗? 液相的分析还是有缺陷。
如果进一步用液质,LC-NMR,
或者制备后进行 晶体衍射
等进一步验证才准确。
frappuccino
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ahuadicp
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风肃
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原文由 frappuccino(frappuccino) 发表:
楼主的论断逻辑错误很多。请专业一点。


请劳烦指出,本来拿出来就是交流的!
风肃
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原文由 frappuccino(frappuccino) 发表:
楼主这是在干嘛? 第一次遇见这种事情吗?
你觉得有意义吗? 液相的分析还是有缺陷。
如果进一步用液质,LC-NMR,
或者制备后进行 晶体衍射
等进一步验证才准确。


这是在做实际样品检测,确证!
风肃
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原文由 ahuadicp(ahuadicp) 发表:
看不明白,比较混乱


化合物也没有写出来,所以看起来简单了!所以在前面还加了一段东西,包括关键词!要是同行的看,估计就会有感觉了!
amugong
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保留时间偏差约0.04分钟,在液相上相差不多,但在气相上应该是不少的差别。最简单的方法楼主应该把你的标准液加入到样品液中,混合好上gc,如果多了一个峰,立马就可以判断为假阳性
sharkwein
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三种方法对比确证很少见,但是UV的样品是否为液相流出组分?基质如何?液相条件下流出时间4.8和4.6也差不少啊
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