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主题：【第三届原创参赛】液相，爱你！——记一次假阳性的验证（更新后）

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风肃
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发表于：2010/07/28 19:38:31 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
该帖子已被有水有渝设置为精华； 奖励积分记录： 有水有渝(20分)
        本文为作者zhufengdr原创，若需转载请直接先与本人取得联系，经双方协商并签定遵守相关协议后才可转载。未经本站作者授权自行转载的，属侵权违法行为。
     
        本文是针对某目标物假阳性检出做的验证过程，先介绍个大概流程吧：样品稀释后（稀释前浓度较高，保留时间偏差约0.04分钟）经过GC-MS检测发现保留时间和谱库检索皆符合目标物，但是考虑该目标物有较多异构体，故采用液相验证！通过分析标准样品、加标样品、稀释后样品，保留时间和吸收都符合，最终通过光谱来确证了，为假阳性！

关键词：GC/MS，HPLC（DAD），稀释、加标，紫外可见吸收光谱

    样品Fullscan（图1）-11.833分钟，与标准溶液相比，该离子出峰时间差约0.04分钟，而且质谱谱库检索对照特征离子及其丰度比定性，与目标物几乎一致,质谱图与谱库检索最匹配结果对比如图2！

middle
图1样品Fullscan


图2 11.833分钟峰的质谱图与谱库检索最匹配结果对比

样品SIM（图3、4）-11.836min

middle

图3 样品SIM

middle



                                          图4 样品SIM放大图
标准样品ＳＩＭ（图5）：

baseline


图5 不同浓度标准样品SIM



    怀疑是浓度高引起时间漂移，如果是这种物质的话，初步定量为144ppm，故稀释15倍（0.1ml->1.5ml）大约为10ppm，定量SIM（图6、7），保留时间与20ppm标准物质一模一样

middle

图6 样品稀释至约10ppm时SIM图

middle



                                图7 样品稀释至约10ppm时SIM放大图

    再次将样品溶液稀释至5ppm，以及另配加标样品（同浓度加标），同时进样标准溶液5ppm,，先经过GC-MS测定，如图8，发现只有一个峰，且与标准物质出峰时间一样!
                                      图8 加标后GC-MS SIM




middle



                                      图9 HPLC/DAD分析

    经过高效液相分析发现（图9），保留时间非常相近，加标后的丰度变化两者综合考虑，应该就是阳性了！从第三点考虑出发，也是关键的一步：紫外-可见吸收光谱对比（图10）。

    根据建立的谱库，样品溶液的4.806分钟峰从峰起始至峰结尾都是同一个光谱图，说明峰纯度高，应该为单一物质，其与标准样品光谱图的特征吸收峰不同。而且加标后的样品从峰起始至峰结束的光谱图时变化的，从以上光谱分析可知，为该出峰物质非目标物质，GC-MS为假阳性检出。


middle



                                                                                                                            图10 UV-Vis对比
附件：
液相，爱你！——记一次假阳性的验证.pdf
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emoc98311
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2010/7/28 22:19:56 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
通常都是色谱做的用质谱来验证，楼主反过来的做法好像很少
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风肃
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2010/7/28 22:28:05 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 老多_小多(emoc98311) 发表:
通常都是色谱做的用质谱来验证，楼主反过来的做法好像很少


标准采用气质和液相两种方法做，而实际中气质效率高很多，所以通常采用气质来做定性定量，但又受限于异构体的分离难度，且日常发现异构体间特征离子及其丰度比都在要求范围内，所以遇有异构体时，采用液相来确证！
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2010/7/28 22:42:30 Last edit by zhufengdr
frappuccino
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2010/7/29 10:58:49 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
楼主这是在干嘛？ 第一次遇见这种事情吗？
你觉得有意义吗？ 液相的分析还是有缺陷。
如果进一步用液质，LC-NMR，
或者制备后进行 晶体衍射
等进一步验证才准确。
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frappuccino
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2010/7/29 11:00:53 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
楼主的论断逻辑错误很多。请专业一点。
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ahuadicp
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2010/7/29 12:23:01 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
看不明白，比较混乱
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风肃
zhufengdr
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2010/7/29 12:39:18 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 frappuccino(frappuccino) 发表:
楼主的论断逻辑错误很多。请专业一点。


请劳烦指出，本来拿出来就是交流的！
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风肃
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2010/7/29 12:40:15 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 frappuccino(frappuccino) 发表:
楼主这是在干嘛？ 第一次遇见这种事情吗？
你觉得有意义吗？ 液相的分析还是有缺陷。
如果进一步用液质，LC-NMR，
或者制备后进行 晶体衍射
等进一步验证才准确。


这是在做实际样品检测，确证!
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风肃
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2010/7/29 12:41:43 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 ahuadicp(ahuadicp) 发表:
看不明白，比较混乱


化合物也没有写出来，所以看起来简单了！所以在前面还加了一段东西，包括关键词！要是同行的看，估计就会有感觉了！
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amugong
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2010/7/29 15:01:19 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
保留时间偏差约0.04分钟,在液相上相差不多，但在气相上应该是不少的差别。最简单的方法楼主应该把你的标准液加入到样品液中，混合好上gc，如果多了一个峰，立马就可以判断为假阳性
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sharkwein
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2010/7/29 17:07:45 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
三种方法对比确证很少见，但是UV的样品是否为液相流出组分？基质如何？液相条件下流出时间4.8和4.6也差不少啊
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