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主题：【求助】怎样彻底清洗色谱柱

浏览0 回复12 电梯直达
halina
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发表于：2010/08/26 18:52:11 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
一次实验时可能是上样量过高了，我们柱子一般应该上10-30ug，我却一次上了100ug，结果好像就有些蛋白附着在柱子上洗不下来了。我是用梯度洗脱，最高用到80%B（95%乙腈,0.1%TFA），现在每次程序走到80%B时总会冒出比较宽大的峰，前两天还没有的。之间我除了一次上了100ug样品这次外，还用甲醇冲了4小时的柱子，冲完就把柱子用80%纯乙腈保存过夜，结果第二天用就出现了上面说的这个问题。
我该怎么办？我们柱子还没用过几次，不会就被我用坏了吧？！我好担心好害怕，这个责任可担不起啊。还请各位高手帮帮忙，指教一下。将不胜感激！
柱子是C4柱（4.6*150mm）。还需要什么信息吗？不管怎样，情各位高手抽点时间给点帮助，谢谢您了！
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2010/8/26 19:30:14 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
打电话咨询一下色谱柱产商的应用工程师问一下有什么处理的好方法，色谱柱反向冲洗行不行？做含蛋白质的样品就好是加一保护柱，以防万一。还有一个方法就是用梯度清洗色谱柱，就用水和乙腈，从10%水到90%乙腈，反复多少清洗。
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2010/8/26 19:31:39 Last edit by xky0230699
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2010/8/26 19:35:29 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
打电话咨询一下色谱柱产商的应用工程师问一下有什么处理的好方法，色谱柱反向冲洗行不行？做含蛋白质的样品就好是加一保护柱，以防万一。还有一个方法就是用梯度清洗色谱柱，就用水和乙腈，从10%水到90%乙腈，反复多少清洗。

梯度清洗估计没什么效果，你可以用10%的异丙醇，小流速冲洗
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halina
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2010/8/26 19:43:12 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
谢谢您，那我用甲醇冲柱子有没有会出问题呢？以前用C18柱子时也会用甲醇冲过液，不是也是能是柱效恢复一些的吗？我明天就打电话问问看，可是好像是进口的柱子啊，是GRACE的，估计没法咨询了。唉
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熊猫宝宝
cbjcn1985
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2010/8/26 19:49:43 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
绝对不建议色谱柱反向冲洗，你已经使用甲醇和乙腈冲洗，效果不好，建议先打电话咨询.
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xue2009
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2010/8/26 20:16:15 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 熊猫宝宝(cbjcn1985) 发表:
绝对不建议色谱柱反向冲洗，你已经使用甲醇和乙腈冲洗，效果不好，建议先打电话咨询.

反冲其实也没什么，虽然会损失些柱效
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halina
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2010/8/26 20:49:29 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
哦，好吧，真不知道电话打到哪里好了，一定要问GRACE吗？我英文交流不是很好啊。要不明天问问其他公司人员吧。
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herokfc
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2010/8/27 15:18:25 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
10%异丙醇低流速冲洗应该可以解决问题，再不行可以考虑10%四氢呋喃，还有就是不建议反向冲洗，天知道这个柱子的前后塞板是不是一致。
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halina
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2010/8/27 16:22:59 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
哦，好的，我暂时先不反冲柱子吧，今天走了几次梯度也没效果。不知10%异丙醇会不会好用，难道会比甲醇效果好很多吗？
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依旧
17284539
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2010/8/27 21:50:22 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
柱子一般是不能反冲的，用甲醇或乙腈小流速多冲一会，会洗干净的
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乐果
zxm-1980
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2010/8/28 9:39:56 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
实在不行，最后不行洗洗滤板。
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