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液相色谱（LC）

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主题：【求助】奇怪的柱压高，如何处理？-Agilent红色警报解除后

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hailingfei2006

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发表于：2010/10/10 11:14:09 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

色谱柱：ODSC18柱(250 mm×4.6mm,5μm)
Agilent 1200配置：在线脱气-G1322A
四元泵-G1311A
自动进样器-G1316A
TCC-G1316A
DADG1315D

前提：
1之前为了建立方法，摸索液相个组分比例，调节乙腈、甲醇、20mm的磷酸二氢钾的各比例，用了一天，正常操作，没问题。
2后来换做20mm的磷酸二氢钾为pH=3.66醋酸水溶液，因为红色警报问题，柱子在乙腈和甲醇，以及pH3.66的环境下，静置了2天。 3前天修好设备，正常的水-甲醇水-甲醇，冲柱子。
4昨天下午开始使用液相，进样DMSO含药母液10ul两针，调节乙腈、甲醇、20mm的磷酸二氢钾的各比例共计2次，操作没问题，下午6点左右发现柱压很低，经检查发现漏液，后拧紧柱子前端的peek（对？）漏液停止，但是压力不稳，跳动很大，后经purge阀除气饱而解决。紧接着，就发现，在50：50的甲醇水当中，柱压很大，立即调节比例为甲醇水10：90，流速0.3，冲了一个晚上，至目前，柱压很高。

问题：
柱压高。表现为，水：甲醇=90：10，柱温40℃，流速1.0ml/min,柱压为152bar。

措施：
分析可能是之前用磷酸盐缓冲液造成晶体析出，所以用水：甲醇=90：10，流速为0.3ml/min冲了一个晚上，今早上来，升至流速为1.0，柱压仍未152，后来提高柱温为40℃，希望增加磷酸盐溶解，冲柱3小时，柱压稳定为146。考虑到柱压变化不大，认为可能有其他杂志，故提高甲醇比例，但是柱压立马就上来，试着纯甲醇，柱压飙升至170还在往上涨，本人立刻将流速将为零，调节至低甲醇比例。

疑问：
1是柱前压力大，还是柱后压力大？怎么操作？
2看论坛上说可以用异丙醇冲，为什么？怎么个比例和操作要求？（流速、柱温，适用条件？）
3要把柱子扯下来，超声么？用纯甲醇超声？柱子上那些配件可以去掉？--仅是方法建立，没进血样，所以没装预柱。
4反冲，什么情况下反冲，会不会很折寿柱子？ -据说很费柱子，基本上学生不想考虑此方法。
5柱压降到什么水平算是正常水平？（甲醇水=10：90），什么范围内我可以进行自己的实验？
6经过讨教，有人建议我调节在柱压为100bar的情况下，按照这个压力下的流速冲柱子一段时间，为什么是这个柱压？
7最好最坏的结果是什么？根据大家的经验，我最久要冲多久？柱压最佳水平预计能恢复到多少？

补充：
1我用的双蒸水是millipore机器产的，没有过滤直接用了，后来配制磷酸盐缓冲液时，发现过滤的时候会有小毛毛，就像是那种及其小的纤维，我在想millipore的双蒸水会不会不过滤也有呢？不知道目前造成柱压高的原因到底是因为磷酸盐还是其他杂质。有过一个步骤，换做甲醇想冲掉溶于有机溶剂的杂志，柱压更是飙升，就没敢冲。

大家说我该怎么办呢？边学边做实验，没想到也液相学问那么大，没想到液相和我这么纠结。
谢谢大家！

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2010/10/10 11:25:27 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

估计是过滤器堵了，卸下来超声吧

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有水有渝

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2010/10/10 11:54:36 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

1、是柱前压力大，还是柱后压力大？怎么操作？
拆去色谱柱就知道是柱前大还是柱后大
2、看论坛上说可以用异丙醇冲，为什么？怎么个比例和操作要求？
用异丙醇的主要作用是它比甲醇的极性弱，可以把一些极性弱的，在纯甲醇下洗脱不完全的物质洗脱下来，在柱子中盐没有冲洗干净前，不可使用纯异丙醇。
3、要把柱子扯下来，超声么？用纯甲醇超声？柱子上那些配件可以去掉？
柱子不能超声，但筛板可以，不过很少有人这么做。建议不管样品基质是否复杂，都加保护柱。
4、反冲，什么情况下反冲，会不会很折寿柱子？
首先是在其它清洗方法都无法解决时使用反冲，还在确定反冲不会把填料冲出来。
5、柱压降到什么水平算是正常水平？
250*4.6mm，5um的色谱柱,1.0流速，一般在纯甲醇下5-6MPa.
6、这个方法没有研究
7、最好最坏的结果是什么？
最好的结果是修复，最坏当然是报废了，修复时间这个难定，我觉得你还是再找找原因。

该帖子作者被版主 xue2009加 2积分， 2经验，加分理由：辛苦啦，呵呵

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2010/10/12 20:54:11 Last edit by xky0230699