主题:【求助】毛细管电流过高问题

浏览0 回复35 电梯直达
SS
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不知道你测的血药水溶性如何,用的SDS浓度太高,有机物浓度太高,pH值太高。
如果血药水溶性还好的话,这些条件说明样品处理的不好,还大分子或蛋白过多,SDS、有机物和高pH都在为消除蛋白影响做贡献。
建议重新处理一下样品,最好用透析膜过一下,40mM硼砂可以,硼砂缓冲液在pH应该在7-9左右缓冲能力好,接近11还是否有缓冲能力了很怀疑,请楼主自己算一下。
降低SDS和有机物量看一看找找条件吧。如果水溶性不佳保持乙腈量,降低点SDS看看,感觉现在的条件不应该是最佳条件。而且不分离蛋白加SDS也有点感觉怪怪的。
SDS含高钠离子,这么大浓度电流不高就怪了。
SDS和有机物都会影响pH的测量。应该是测定好硼砂缓冲液的pH后,定量加入SDS和乙腈,然后不要再测pH了。SDS强吸附会钝化玻璃电极膜的,测久了等着换pH的玻璃电极吧。

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i_am_ling
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可以通过改变其他条件来降低电流,比如降低电压,降低缓冲溶液的浓度等
cyljoa
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原文由 SS(wangsl911) 发表:
不知道你测的血药水溶性如何,用的SDS浓度太高,有机物浓度太高,pH值太高。
如果血药水溶性还好的话,这些条件说明样品处理的不好,还大分子或蛋白过多,SDS、有机物和高pH都在为消除蛋白影响做贡献。
建议重新处理一下样品,最好用透析膜过一下,40mM硼砂可以,硼砂缓冲液在pH应该在7-9左右缓冲能力好,接近11还是否有缓冲能力了很怀疑,请楼主自己算一下。
降低SDS和有机物量看一看找找条件吧。如果水溶性不佳保持乙腈量,降低点SDS看看,感觉现在的条件不应该是最佳条件。而且不分离蛋白加SDS也有点感觉怪怪的。
SDS含高钠离子,这么大浓度电流不高就怪了。
SDS和有机物都会影响pH的测量。应该是测定好硼砂缓冲液的pH后,定量加入SDS和乙腈,然后不要再测pH了。SDS强吸附会钝化玻璃电极膜的,测久了等着换pH的玻璃电极吧。


楼主说的好详细,先谢谢啊。
我的药物就是水溶液比较好,有人建议我用盐析辅助液液萃取,我尝试了下,但还是不理想,不知是不是哪里操作有问题:
50ul空白血浆+10ul药物+10ul内标+50mg硫酸钠+0.5ml二氯甲烷-异丙醇,混旋10s,有沉淀产生,然后在3000r/min下离心5min,得到上清液于另一离心管,挥干,溶解,进样。检测发现还是有内源性杂质影响分离。我在想是不是我得到的这个上清液中含有水相,是不是还应该再离心一次,使水相和有机相分层。
另外,我之所以加这么多SDS,是想增强荧光强度。增加检测灵敏度。
i_am_ling
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不知道你测的血药水溶性如何,用的SDS浓度太高,有机物浓度太高,pH值太高。
如果血药水溶性还好的话,这些条件说明样品处理的不好,还大分子或蛋白过多,SDS、有机物和高pH都在为消除蛋白影响做贡献。
建议重新处理一下样品,最好用透析膜过一下,40mM硼砂可以,硼砂缓冲液在pH应该在7-9左右缓冲能力好,接近11还是否有缓冲能力了很怀疑,请楼主自己算一下。
降低SDS和有机物量看一看找找条件吧。如果水溶性不佳保持乙腈量,降低点SDS看看,感觉现在的条件不应该是最佳条件。而且不分离蛋白加SDS也有点感觉怪怪的。
SDS含高钠离子,这么大浓度电流不高就怪了。
SDS和有机物都会影响pH的测量。应该是测定好硼砂缓冲液的pH后,定量加入SDS和乙腈,然后不要再测pH了。SDS强吸附会钝化玻璃电极膜的,测久了等着换pH的玻璃电极吧。


讲的很详细,学习了!
sunpengwjh
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原文由 SS(wangsl911) 发表:
不知道你测的血药水溶性如何,用的SDS浓度太高,有机物浓度太高,pH值太高。
如果血药水溶性还好的话,这些条件说明样品处理的不好,还大分子或蛋白过多,SDS、有机物和高pH都在为消除蛋白影响做贡献。
建议重新处理一下样品,最好用透析膜过一下,40mM硼砂可以,硼砂缓冲液在pH应该在7-9左右缓冲能力好,接近11还是否有缓冲能力了很怀疑,请楼主自己算一下。
降低SDS和有机物量看一看找找条件吧。如果水溶性不佳保持乙腈量,降低点SDS看看,感觉现在的条件不应该是最佳条件。而且不分离蛋白加SDS也有点感觉怪怪的。
SDS含高钠离子,这么大浓度电流不高就怪了。
SDS和有机物都会影响pH的测量。应该是测定好硼砂缓冲液的pH后,定量加入SDS和乙腈,然后不要再测pH了。SDS强吸附会钝化玻璃电极膜的,测久了等着换pH的玻璃电极吧。


回答的很详细,希望您继续来论坛指导大家!
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