主题：【求助】请教高手：贝克曼毛细管电泳如何实现DNA的检测

原文由 jcok123(jcok123) 发表:

原文由 katherine7(katherine7) 发表:
请教高手：贝克曼毛细管电泳如何实现DNA的检测
要分离的是180-250bp整数倍的DNA片段
该以什么为标准品来进行检测呢？
现在在尝试用100bp DNA ladder用检测，但始终分离不出来
不知道是不是因为缓冲体系不好
目前用的是75μm的柱子，缓冲液0.1M 硼酸+ 0.1M Tris

给你介绍一篇我们课题组发表的文献吧，应该对你有帮助

Tetrabutylammonium phosphate-assisted separation of multiplex PCR products
in non-gel sieving capillary electrophoresis

原文由 jcok123(jcok123) 发表:

原文由 katherine7(katherine7) 发表:
请教高手：贝克曼毛细管电泳如何实现DNA的检测
要分离的是180-250bp整数倍的DNA片段
该以什么为标准品来进行检测呢？
现在在尝试用100bp DNA ladder用检测，但始终分离不出来
不知道是不是因为缓冲体系不好
目前用的是75μm的柱子，缓冲液0.1M 硼酸+ 0.1M Tris

给你介绍一篇我们课题组发表的文献吧，应该对你有帮助

Tetrabutylammonium phosphate-assisted separation of multiplex PCR products
in non-gel sieving capillary electrophoresis

原文由 heguang(heguang) 发表:
你的缓冲体系里面为什么没有看到凝胶？Tris-硼砂的体系用来分离dsDNA是没有错，但是你一定要加凝胶进去的，没有凝胶，你怎么把不同长短的DNA分开呢？同时你还要考虑DNA在毛细管内壁吸附的问题，如果你用裸管做，你就要用有动态吸附性质的凝胶，PVP效果不错；如果你用的没有动态涂层作用的凝胶，你就必须要用涂层毛细管做。毛细管长短不是关键，一般分DNA的毛细管40-50cm足够，75um也没有问题（LIF检测），如果紫外检测就用100um。

原文由 poplar_yang(poplar_yang) 发表:

原文由 katherine7(katherine7) 发表:
那请问，除了改用毛细管长住外，在分离DNA时，缓冲体系上是否要用硼酸来调pH呢？

pH值需要计算; 可设置楼梯; 硼酸可以pH4-12, NaH2PO4可以pH1-9等等

原文由 heguang(heguang) 发表:
你的缓冲体系里面为什么没有看到凝胶？Tris-硼砂的体系用来分离dsDNA是没有错，但是你一定要加凝胶进去的，没有凝胶，你怎么把不同长短的DNA分开呢？同时你还要考虑DNA在毛细管内壁吸附的问题，如果你用裸管做，你就要用有动态吸附性质的凝胶，PVP效果不错；如果你用的没有动态涂层作用的凝胶，你就必须要用涂层毛细管做。毛细管长短不是关键，一般分DNA的毛细管40-50cm足够，75um也没有问题（LIF检测），如果紫外检测就用100um。