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主题：【讨论】物质的紫外最大吸收波长是否可以作为荧光激发波长?

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有水有渝
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发表于：2010/11/19 10:34:30 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
      荧光检测器是高压[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p]液相色谱[/url]仪常用的一种检测器。用紫外线照射色谱馏分，当试样组分具有荧光性能时，即可检出。其特点是选择性高，只对荧光物质有响应；灵敏度也高，最低检出限可达10-12g/ml，适合于多环芳烃及各种荧光物质的痕量分析。也可用于检测不发荧光但经化学反应后可发荧光的物质。如在酚类分析中，多数酚类不发荧光，为此先经处理使其变为荧光物质，而后进行分析。荧光属于光致发光，需选择合适的激发光波长(Ex)以利于检测。激发波长可通过荧光化合物的激发光谱来确定。激发光谱的具体检测办法是通过扫描激发单色器，使不同波长的入射光激发荧光化合物，产生的荧光通过固定波长的发射单色器，由光检测元件检测。最终得到荧光强度对激发波长的关系曲线就是激发光谱。在激发光谱曲线的最大波长处，处于激发态的分子数目最多，即所吸收的光能量也最多，能产生最强的荧光。当考虑灵敏度时，测定应选择最大激发波长。

1、很多版友都因为没有荧光分光光度计而无法得到荧光扫描光谱，不知道如何选择激发波长，那么是否可以通过紫外扫描图谱的最大吸收波长来选择呢？
2、荧光激发波长与荧光发射波长之间存在什么样的关系，发射波长又要如何选择呢？
附件：
醇类溶液的紫外吸收和荧光光谱研究.pdf
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2010/11/19 11:21:39 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
可以作为激发波长,激发波长的选择不影响发射波长的选择,理论上激发光谱和发射光谱有一个镜像关系,很多人就误以为,激发波长和发射波长时一一对应的,其实不然,激发光谱的强弱只代表该物质在所选择的激发波长下被激发的比率,其发射光谱还是原来形状的光谱,只是在强弱上改变.我们选择最大激发波长是为了获得高激发率的物质形态,间接提高灵敏度,选择最大发射波长是为了直接提高灵敏度
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2010/11/19 11:25:25 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我当初做毕业设计就是荧光化合物，就是用紫外全扫检测最大吸收波长，然后用荧光仪在此波长下检测荧光
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有水有渝
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2010/11/19 11:34:06 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 lytion(lytion) 发表:
我当初做毕业设计就是荧光化合物，就是用紫外全扫检测最大吸收波长，然后用荧光仪在此波长下检测荧光


是否有比较过紫外扫描与荧光扫描之间有什么不一样吗？
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2010/11/19 14:35:21 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 kkbyb(kkbyb) 发表:
可以作为激发波长,激发波长的选择不影响发射波长的选择,理论上激发光谱和发射光谱有一个镜像关系,很多人就误以为,激发波长和发射波长时一一对应的,其实不然,激发光谱的强弱只代表该物质在所选择的激发波长下被激发的比率,其发射光谱还是原来形状的光谱,只是在强弱上改变.我们选择最大激发波长是为了获得高激发率的物质形态,间接提高灵敏度,选择最大发射波长是为了直接提高灵敏度

发射波长不会随激发波长的改变而改变，这点很给力，呵呵
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青林
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2010/11/20 21:36:16 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
一般是可以作为激发波长
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2010/11/20 21:53:33 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
原文由 lytion(lytion) 发表:
我当初做毕业设计就是荧光化合物，就是用紫外全扫检测最大吸收波长，然后用荧光仪在此波长下检测荧光


是否有比较过紫外扫描与荧光扫描之间有什么不一样吗？


当初大学做毕设而已，老师是一直做合成荧光化合物的让这么做，我们就按照方法做下去了。很多年前的事情了很多细节都忘的差不多了。
印象里紫外最大吸收波长下的物质用荧光检测器检测得到的峰面积是最大的。个人当初对这方面理解不深如有错误请见谅
我也不是用的液相的荧光检测器，就是个日立的荧光检测仪
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2010/11/20 23:16:45 Last edit by lytion
天涯就是天地
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2010/11/20 22:32:21 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
紫外跟荧光肯定有一定的差别，但是可以作为激发波长的吧。
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2010/11/20 23:33:15 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
找了找我的毕业论文，大家凑合看看，我都忘得差不多了。

  电子跃迁时吸收或发射的能量并不是任意的，而是受到电子能级的制约，只能吸收或发射一定波长范围内的光。含有共轭双键体系的有机化合物，容易吸收激发光，其激发波长大多处于近紫外区或可见光区，发射波长多处于可见光区。光的发射波长和激发波长之间的差值叫斯托克斯(stokes)位移，斯托克斯位移越大，其激发光谱和发射光谱的重叠就越少，就有利于提高其分辨率。
  分子的第一激发态与基态的能差是一定的，因而荧光波长不随激发光波长的改变而发生变化。分子激发过程中吸收的能量一般高于荧光辐射释放的能量，二者之差以热的形式损耗，因此荧光波长比激发光波长要长，其差通常为50nm~70nm，当有机化合物分子内可以形成氢键时，则增至150nm~250nm，这一规律称为Stokes位移。荧光的强度受许多因素的制约，如激发光源能量、吸收强度、量子效率等。量子效率也称量子收率，是指荧光物体分子发射的光量子数与吸收的光量子数之比。其大小是由分子结构决定的，而与激发光源的能量无关。

1. Stokes位移：激发光谱与发射光谱之间的波长差值。发射光谱的波长比激发光谱的长，振动弛豫消耗了能量。
2. 激发光谱：固定发射波长，用不同的激发光激发样品，记录下相应的荧光发射强度，即得激发光谱。
3. 发射光谱：固定激发波长，记录在不同波长所发射的荧光的相对强度，即得发射光谱。
4. 荧光光谱：固定测量波长(选最大发射波长),化合物发射的荧光强度与照射光波长的关系曲线。激发光谱曲线的最高处，处于激发态的分子最多，荧光强度最大。

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有水有渝
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2010/11/21 18:39:33 11楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 青林(wyqql2060) 发表:
一般是可以作为激发波长


有何依据， 你使用紫外最大吸收波长作为荧光激发波长吗？
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有水有渝
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2010/11/21 18:40:40 12楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 天涯就是天地(tianyamzn) 发表:
紫外跟荧光肯定有一定的差别，但是可以作为激发波长的吧。


那发射波长如何选择呢，有没有什么经验，比如从结构上能大概判断出来吗？
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