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液相色谱（LC）

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主题：【分享】岛津LC-2010A型HPLC操作规程

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zhang8826857

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发表于：2011/11/17 02:50:14 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

1、目的
规范岛津LC-2010A型高效液相色谱仪的使用。
2、范围
适用于岛津LC-2010A型高效液相色谱仪的使用。
3、规程
3.1 系统组成
本系统由容器箱、自动进样器、检测部、输液部、柱温箱、系统控制器、Easy3000工作站和电脑等组成。
3.2 准备
3.2.1 准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气至少20min。
3.2.2 根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）。
3.2.3 配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用0.45μm滤膜过滤。
3.2.4 检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。
3.3 开机
接通电源，按下系统控制器面板上的电源开关上托画面上显示要输入Login Pass-ID-No的对话框，输入00000后，按 [OK] 显示Menu画面，
选择Method画面，在Method画面进行相关参数设定，然后打开电脑显示器、主机，最后打开色谱工作站。

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2011/11/17 2:50:34 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

3.4 参数设定
3.4.1 波长设定在Method画面上，将光标置于UV-VIS检测器波长设定的栏内，用数字键输入所需波长值，按[Enter]键确认。
3.4.2 流速设定在Method画面上，将光标置于流量设定的栏内，用数字键输入所需的流量（柱在线时流量一般不超过1ml/min），按[Enter]键确认。
3.4.3 流动相比例设定在Method画面上，将光标置于流动相混合比率设定的栏内，在A-D上，用数字键输入所需流动相的混合比率，按[Enter]键确认。
3.4.1 柱温设定在Method画面上，将光标置于柱温箱温度设定栏，用数字键输入柱温箱所需的温度，按[Enter]键确认。
3.5 更换流动相并排气泡
3.5.1 将管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中；
3.5.2 逆时针转动泵的排液阀180°，打开排液阀；
3.5.3 在Method画面上，按[purge]键显示清洗设定的上托画面，pump键旁的绿指示灯亮，输液泵开始工作。
3.5.4 依次按下使用的流动相通道和冲洗液通道的功能键，即流路A
、流路B 、流路C 、流路D 及自动进样的冲洗液
，泵大约以8ml/min的流速冲洗，清洗完成后自动停止。
3.5.5 将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。
3.5.6 如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。
3.5.7 如按以上方法不能排尽气泡，从柱入口处拆下连接管，放入废液瓶中，设流速为5ml/min，按[pump]键，冲洗3min后再按[pump]键停泵，重新接上柱并将流速重设为规定值。

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2011/11/17 2:51:31 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

3.6 平衡系统
3.6.1 按《Easy3000色谱数据工作站操作规程》打开“Easy3000色谱工作站”软件，输入实验信息并设定各项方法参数后，等待系统平衡。
3.6.2 等度洗脱方式
3.6.2.1 按泵的[pump]键，泵启动，pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积（约30min）的流动相。
3.6.2.2 检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。
3.6.2.3 观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按3.5.6操作。
3.6.2.4 观察基线变化。如果冲洗至基线漂移<0.01mV/min，噪声为<0.001mV时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。
3.6.3 梯度洗脱方式
3.6.3.1 以检验方法规定的梯度初始条件，按3.6.2项下方法平衡系统。
3.6.3.2 在进样前运行1~2次空白梯度。方法：具体操作详见LC-2010A操作说明书34页3.4.6梯度洗脱的设定。
3.7 进样
3.7.1 进样前按检测器[zero]键调零，按软件中 [零点校正] 按钮校正基线零点。
3.7.2 按下系统控制器面板上的Run键，系统自动进样。
3.8 清洗柱及进样系统和关机
3.8.1数据采集完毕后，关闭检测器，继续以工作流动相冲洗20min后，（如流动相含缓冲盐，换为不含缓冲盐的同比例流动相在冲洗20min），再换用纯水冲洗系统及色谱柱至少60min，最后用甲醇或乙腈冲洗至少30min。
3.8.2 冲洗完柱后，将整个流路都置于有机溶剂中，按3.5.4清洗整个流路及进样系统。
3.8.3 清洗完成后，先将流量降到0，关闭电源开关。
3.8.4 每次实验完毕，均需更换循环瓶中的水。
3.8.5 认真填写仪器使用记录。

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