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主题：【已应助】Q-TOF 蛋白 分子量

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chengq1898
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发表于：2012/03/27 22:41:45 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
最近用Waters公司synapt Q-TOF 测蛋白分子量，柱子是Thermo的 C4 C8，发现分子量大于70kD的都测不出来，还有蛋白混合物也不能全部找到所有的蛋白，请问大虾们有解决的办法没，谢谢！
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2012/3/28 13:51:53 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
ESI-Q-TOF 测定蛋白等物质，理论上分子量是没有上限的，但是质荷比（m/z）一般不超过3000。
对于分子量特别大的，可以尝试使其带上更多的电荷，降低m/z，应该会更方便检测。
要不就干脆换仪器，用 MALDI-TOF。
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chengq1898
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2012/3/28 16:25:53 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
谢谢！ 我再摸索下条件
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徐有才
xuox
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2012/3/28 19:21:10 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
分子量过大是不是堵在柱子里面了？蛋白的ESI 信号应该不错啊 可以加点甲酸～
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chengq1898
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2012/3/29 14:05:05 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
0.1%甲酸加了的，C4的柱子应该不会堵吧，可能样品问题？
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daoyuanli
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2012/3/30 16:48:41 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
ESI-Q-TOF测个70-80kDa应该不是什么问题。
曾经用AB的Q-TOF测过150kDa的蛋白
分离蛋白也一般用C4，C8的色谱柱啊，
是不是离子化的条件没优化好啊？
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daoyuanli
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2012/3/30 16:50:15 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
用MALDI-TOF测不出精确分子量的。
测蛋白，误差大。
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zhufangwei
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2012/4/10 23:00:27 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 daoyuanli(daoyuanli) 发表:
用MALDI-TOF测不出精确分子量的。
测蛋白，误差大。


楼上的质谱是什么型号的
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daoyuanli
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2012/4/13 22:43:09 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 zhufangwei(zhufangwei) 发表:
原文由 daoyuanli(daoyuanli) 发表:
用MALDI-TOF测不出精确分子量的。
测蛋白，误差大。


楼上的质谱是什么型号的


AB 4800
不管是什么型号的MALDI-TOF
分子量超过一万以上一般只能用线性模式
用线性模式质量精度和分辨率都会变差的
误差几十个道尔顿是很正常的事
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yzulcl
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2012/4/14 16:17:48 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
线性模式确实分辨率低、质量准确度也差。
但是为什么超过一万的分子量就不能用反射模式了？是因为在飞行管中飞行速度太慢了？烦请指教，谢谢！
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maldiguy
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2012/4/24 18:33:19 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
先用BSA啥的调调电离条件，然后再做
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