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液相色谱（LC）
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主题：【讨论】关于LC的死时间的一点疑惑

浏览0 回复9 电梯直达
light2357302
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发表于：2012/06/22 06:05:47 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
昨天我看到的一篇资料上对于死时间的定义：不保留组分的保留时间，即流动相通过色谱柱的时间，在反相HPLC中可用苯磺酸钠来测定。
我的疑惑是，既然死时间是流动相通过色谱柱的时间，那如果已知色谱柱的参数，250cm*4.6mm*5um和流动相的流速1,不也可以计算出流动相通过色谱柱的时间吗？为什么要用苯磺酸钠来计算呢？
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2012/6/22 7:26:43 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你这定义有错吧
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有水有渝
xky0230699
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2012/6/22 8:21:34 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
250cm*4.6mm*5um和流动相的流速1,不也可以计算出流动相通过色谱柱的时间吗？

无法计算，因为色谱柱的空隙体积你是无法直接估计的，同样的25cm长的色谱柱，不同填料，不同的填料紧密度等都会导致无法估计。
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kaifukgd
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2012/6/22 9:14:34 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
是的，正如楼上老师所说，色谱柱的死体积是无法直接估计的，不同的柱子以及不同的仪器，系统的死体积都是不一样的，所以不能用流速来计算。
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houjjun
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2012/6/23 14:18:06 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
2楼3楼的老师说的很对，每一根色谱柱都不一样，每一套色谱系统也不一样，每一种流动相也会影响他，每一个环境每一个仪器条件都会影响到他，可算是无法算出来的
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flyaway
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2012/6/23 20:23:33 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我怎么觉得苯磺酸钠也是有保留的呢?
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安平
byron1111
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2012/6/24 13:31:50 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
为什么呢？

    在水系系统，盐类应该保留甚弱
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有水有渝
xky0230699
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2012/6/24 16:16:11 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 flyaway(flyaway) 发表:
我怎么觉得苯磺酸钠也是有保留的呢?


把苯磺酸钠与尿嘧啶混合溶液在相同色谱条件下进样检测一下看看是不是一样。
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zhaohua8011
zhaohua8011
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2012/6/25 8:58:17 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
计算死体积应该是相对参考值！
网上有一文章，如此计算：
色谱柱死体积（Vm）：色谱柱内部的流动相体积；
1．Vm≈0.5*L*D2  （L为柱长（cm），D为柱子内径（cm）；下同）；
2．Vm≈0.1*L （仅适用于内径0.46cm的色谱柱）；
3. 以尿嘧啶的出峰时间计算；


以elite 4.6*150（mm） 的色谱柱分别计算：
1.Vm≈0.5*15*0.462≈1.59ml；
2.Vm≈0.1*15≈1.5ml；
3.以柱子COA上检测条件计算，0.9ml/min下尿嘧啶的出峰时间为1.73min，其死体积为：

Vm=0.9*1.73=1.56ml；

  从计算结果来看，三个公式相差不大，基本可以通用。
该帖子作者被版主 xky0230699加 2积分， 2经验，加分理由：感谢分享
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2012/6/25 9:01:20 Last edit by zhaohua8011
安平
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2012/6/25 17:50:09 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
而且苯磺酸钠在紫外检测器可以出峰，就是选择他的原因。
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