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主题：【求助】流动相的改变影响含量？

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daisy3382
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发表于：2012/07/11 08:40:20 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
有一芳香酸和一芳香醛，HPLC分析过程中发现，流动相中有机相比例的改变得到的含量不一样
有机相为乙腈和乙酸的水溶液
附图，我觉得两个分离度都还可以，但是含量有差

这是乙腈比例为45的图，两个主峰含量为22.33&77.49

这是乙腈比例为40的图，两个主峰含量为20.19&79.67
为啥含量会受流动相影响呢？
请前辈们指导指导啊
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zhaohua8011
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2012/7/11 8:57:43 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
有机相比例的不同，会影响洗脱能力，建议在相同的条件下进对照及样品！
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daisy3382
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2012/7/11 9:12:43 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 zhaohua8011(zhaohua8011) 发表:
有机相比例的不同，会影响洗脱能力，建议在相同的条件下进对照及样品！

那个芳香酸不溶于乙腈，我是事先用DMF溶了再用流动相稀释的，是不是进柱子后，洗脱不完全呢？
在相同的条件下进对照及样品，意思是外标定量么？
在同一个条件下做的含量是平行的
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zhaohua8011
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2012/7/11 9:34:25 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
洗脱能力影响极大，通常用外标定量即可！
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daisy3382
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2012/7/11 10:02:16 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 zhaohua8011(zhaohua8011) 发表:
洗脱能力影响极大，通常用外标定量即可！

好的，谢谢你，我是第一次发现在达到分离度的情况下，流动相比例的改变会影响含量的。
之前做别的物质的HPLC方法的建立的时候也没发现有这个问题的存在。
是不是不同的物质影响不一样啊？
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有水有渝
xky0230699
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2012/7/11 10:44:35 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 daisy3382(daisy3382) 发表:
原文由 zhaohua8011(zhaohua8011) 发表:
有机相比例的不同，会影响洗脱能力，建议在相同的条件下进对照及样品！

那个芳香酸不溶于乙腈，我是事先用DMF溶了再用流动相稀释的，是不是进柱子后，洗脱不完全呢？
在相同的条件下进对照及样品，意思是外标定量么？
在同一个条件下做的含量是平行的


归一法肯定受流动相调节的影响，往往保留时间越往后，峰面积越大，主要是峰展宽带来的影响。如果是用对照品法就可以消除这一系统误差。
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2012/7/11 10:45:23 Last edit by xky0230699
houjjun
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2012/7/11 12:27:58 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
流动相比例不一样，他们出峰时间就会不一样，洗脱强度也会不一样，会导致他们的分离程度也就不一样，峰宽也不一样，所以峰面积肯定会不一样，含量必然也就不一样了。

做实验时色谱条件是不能随意改变的，一旦改变了，这个样或这批样的结果多少会有变化。
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2012/7/11 13:22:45 Last edit by xky0230699
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xyhdcm2002
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2012/7/11 13:17:59 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
没理由啊，如果是同样条件进对照和样品。含量应该一致才对
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daisy3382
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2012/7/11 13:54:58 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 1818(xyhdcm2002) 发表:
没理由啊，如果是同样条件进对照和样品。含量应该一致才对

“同样条件进对照和样品。含量应该一致才对”啥意思？不是很明白。请指教
我现在的问题是分析同一个混合样，流动相比例改变了，混合样中两者面积百分含量也会变？
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2012/7/11 13:58:17 Last edit by daisy3382
daisy3382
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2012/7/11 13:57:22 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 houjjun(houjjun) 发表:
流动相比例不一样，他们出峰时间就会不一样，洗脱强度也会不一样，会导致他们的分离程度也就不一样，峰宽也不一样，所以峰面积肯定会不一样，含量必然也就不一样了。

做实验时色谱条件是不能随意改变的，一旦改变了，这个样或这批样的结果多少会有变化。

之前分析过一个样品，流动相比例变了，出峰时间也变了，分离强度也不一样，但是归一化时面积含量百分比是不变的。
这次做的样是变的，所以疑惑的。
是不是不能一概而论，还是要看具体的分析物质的？
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371147760
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2012/7/11 14:40:33 11楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
不应该啊，我只做过单一的药物，改变流动相比例后药物峰高和峰面积会发生变化，但是峰面积不会发生变化，
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