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主题：【已应助】液质中空白样出峰？

浏览0 回复8 电梯直达
zsyj01
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发表于：2012/08/23 16:24:13 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
　　我刚开始上手液质，没经验，请大家帮忙分析一下实验中遇到的问题。

　　我用的是c18, RP, 100mm, 2.1um 的柱子，样品是steroids, 貌似很粘柱子。

　　gradient用的是： 100H20+0.1%formic acid 99.9%MtOH+0.1% formic acid

　　0 min: 60% 40%

　　5 min: 0% 100%

　　10min: 0% 100%

　　15min: 60% 40%

　　然后样品都是在6分多钟才洗出来，强度都还是挺稳定的。 但是，在接着样品之后，我把样品换成100%甲醇，然后一样的gradient, 跑了5次，居然每次都在6，7 分钟有峰出来，而且强度还很大，有的比我50ng/ml 的样品还高。

　　换了进样针，还是一样的问题。我就一直用100%甲醇跑，想把柱子上可能残留的样品都洗完。我样品换成100%的甲醇，然后一直保持流动相为100%甲醇不变30分钟，但是奇怪的是，这样跑了好几次，每次都是一开始一两分钟内有个峰，强度在10的3次方左右，跟我的样品差不多了，然后后面就没峰了。但是如果洗干净了的话，为什么每次接下来还是一样有峰呢?

　　大家会液质的同学，帮我看看吧，多谢多谢了!!
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happy爱米粒
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2012/8/23 21:40:12 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
楼主的样品溶解液是什么比例？建议擦洗一下离子源
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chy57589893
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2012/8/24 8:24:10 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
四点，1.首先你需要确定你的空白样品溶液是否受到了污染，我是说在你的前处理过程中的污染，因为你的空白样的面积比标液的都大，排除了是在进样过程中的污染。
2.先用丰度比确认下空白样出的这个峰是不是被测组分，如果不是的话，就是干扰，就要想办法分离（更换色谱柱或者调整流动相）。
3.建议你做空白试验，作下试剂的排除
4.另外，如果怀疑是柱残留，也不能光是拿100%甲醇来冲洗就能洗脱的，需要进行梯度洗脱的。
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zhulityx
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2012/8/24 9:32:56 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
楼主这种情况的话，有可能残留……残留可以在柱子、peek管、六通阀、液相进样针等地方发生，所以建议楼主一步步地排查……
首先，很重要的一点，如楼上所说的，确定空白样品峰是否目标离子峰，如果不是，就要调流动相比例分开就行了。。
1.排查色谱柱，将色谱柱移除，其它的条件不变，看看进样后再进几针空白是否还有你说的残留的情况，注意这个时候的出峰时间是很前的，如果有的话，继续排查……（进空白针的时候流动相比例不能变…………），如果没有残留了，楼主在洗柱子的时候可以尝试用其它的空白样品，但是流动相的比例以及分析时间最好不变……
2.如果色谱柱不残留，接下来要考虑六通阀：把液相的管路不通过六通阀直接连接到质谱，再重复第一个步骤，还是有残留的话，冲洗peek管或者更换peek管，如果这样还有的话，建议楼主检查自己的流动相以及前处理是否带入污染…………
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lynch_xiaoyi
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2012/8/24 20:40:02 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
空白样是目标峰阿，用的是SRM, 271-109,就用这个离子对是空白样的峰差不多是样品响应值得一半。换别的离子对空白样就没峰了。

昨天百自动进样器的针座洗了，还是这种情况。这种会是柱子上的残留吗 ，如果柱子上有残留，为什么会是跟样品一个洗脱时间出来呢？
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小猪飞飞
zpf20031212
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2012/8/28 23:40:19 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 lynch_xiaoyi(lynch_xiaoyi) 发表:
空白样是目标峰阿，用的是SRM, 271-109,就用这个离子对是空白样的峰差不多是样品响应值得一半。换别的离子对空白样就没峰了。

昨天百自动进样器的针座洗了，还是这种情况。这种会是柱子上的残留吗 ，如果柱子上有残留，为什么会是跟样品一个洗脱时间出来呢？


271-109是什么物质？看看是不是六通阀的污染。柱子上如果有的话，一般是在柱头部分，建议以后做样时加上合适的预柱
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Insp_8d3058ba
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2019/10/5 10:18:24 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
请问楼主问题解决了吗？我用AB6500做多肽定量的时候也遇到了类似问题，想向您请教一下
微信15205157228
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liumanglao
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2020/6/18 14:41:09 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我前两天也碰到类似问题，结果发现是溶剂被待测物污染了
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Ins_795b3b60
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2023/7/14 20:00:31 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
遇到同样的问题加一，是不是需要使用楼上大佬的方法排查一下？
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