主题:【第六届原创】生物内样品预处理

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wzdlhh
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生物内样品预处理



生物样品成分复杂,往往含有大量有机物、无机物及各种矿物质元素,在对目标成分进行分析检测时,首先要排除内源性杂质及代谢物的干扰,又要对目标成分进行富集纯化以满足仪器检测灵敏度的要求。在处理的过程中,还要密切关注目标成分的理化性质,如失活,空气氧化,蛋白水解等,生物样品的提取制备繁琐复杂,下面我们对一些常规的预处理方法进行归类总结。

1.样品均匀化

样品均匀化可采用物理方法和化学方法。简单总结如下:

   



2.去蛋白处理

蛋白质的存在常常干扰生物样品中一些小分子化合物的检测。在色谱分析中,蛋白质的存在有可能会堵塞色谱柱,导致柱压升高,影响柱效,对仪器产生较大损伤。去除蛋白质的方法主要有:

2.1 加入与水混溶的有机溶剂

对于生物样品中极性成分,可加入极性有机溶剂甲醇、乙腈、乙醇、丙酮等,它们能与水互溶,使样品中的蛋白质脱水沉淀。按体积比1:2加入过量极性有机溶剂,离心,可沉淀98%的蛋白质。

优点:蛋白脱水生成沉淀,通过离心即可除去,操作简便;若样品用于反相高效液相色谱法进行分析,上清液与流动相相匹配。

局限性:但凡能溶于水-醇系统的物质,均在上清液中被提取出来,对于目标成分并没有很好的分离,上清液由于加液量多,难于挥干浓缩,残留的微量蛋白有可能会引起色谱柱堵塞。

2.2加入酸性沉淀剂

酸性沉淀剂能同蛋白质的阳离子形成不溶性盐。加酸性沉淀剂10%三氯醋酸、6%高氯酸钼、钼酸、磷钨酸、苦味酸等,调节溶液的pH值低于蛋白的等电点,使蛋白形成白色沉淀,加热使淀完全,离心,得上清液。

优点: 沉淀作用强,0.2体积即达99.7%的沉淀率。

局限性:上清液须用乙醚等萃取,萃取剂可能对目标成分产生干扰。

2.3加入无机盐类

无机盐类可以使蛋白质胶体脱水并中和其电荷而沉淀。常用无机盐类:饱和硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等。

局限性:沉淀率较低。

2.4加入重金属盐类

重金属盐类如汞盐、铜盐、锌盐等可与蛋白质形成不溶性盐而沉淀

2.5其它非化学方法

可用平衡透析法、超滤法去除大分子蛋白。液液萃取或液固萃取在萃取药物的同时,直接去蛋白。

3.冷冻干燥

冷冻干燥是生物预处理的有效方法,主要适用于水溶性较强的生物样品。将生物样品置于液氮、冰-丙酮浴或-40℃冰箱等低温条件下冷冻,冷冻好的样品放入冻干机中减压干燥,干燥的过程冰直接升华为水蒸气,其它杂质也一并挥发掉





4.结合物水解

药物在代谢后形成的葡萄苷酸、硫酸酯等结合物,使药物无法以游离状态存在,若要检测药物离子浓度,则需要通过酸水解、酶水解、溶剂解等方式。

5.贮存

预处理好的生物样品如在短期(如日内)即行分析的样品,置于4℃冰箱冷藏;需放置数日或较短时日的:-20℃冷冻;长期贮存:-40℃~ -80℃。

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这个没做过,看起来一定非常费时间,看以后有机会接触了再看了。
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