主题：【第七届原创】【开学季】-“虐”我两天的灯盏花

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发表于：2014/09/25 23:02:55 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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“虐”我两天的灯盏花

前言最近实验室来了一批灯盏花素原料药，实验室几个同事做了好几次含量测定都不符合要求。上级领导吩咐让我接手，展开实验室内部调查。于是乎一场和灯盏花素的“较量”正式开始了。

我所使用的主要的仪器有：Agilent 1260 --VWD 液相色谱仪赛多利斯 BS-125D 电子分析天平

首先从检验的标准依据开始，打开药典灯盏花素的页面。如下图所示：

刚开始感觉这个方法很普通，就是一个简单的液相色谱方法，没这么在意。按部就班的配制流动相，称取对照品和样品稀释超声出理等一系列的过程忙活起来，两个小时后样品盒对照品都处理好了，上机测试开始，打第一针后问题就来了。

第一个问题是理论踏板数不符合要求。标准要求不得低于5000，（下图中红圈部分，明确要求要达到5000）。

而我们的测定结果只有3000多。没办法我找来了三根色谱柱开始，选一个符合要求的使用。三根柱子分别编号1, 2，3号。

使用1号柱子的色谱图如下：

很明显1号柱子的色谱峰严重拖尾，不能用来定量。只好更换第2号柱子分析。分析结果如下：

由上图可知色谱峰的峰型大有改善，峰很好看，关键的是理论塔板数只有 3576，仍然不能满足5000的要求。只好使用3号根住子，3号是150mm的短柱，分析结果如下：

由3号柱子的分析结果可以看出，色谱峰的峰型较2号柱的峰型胖了点。峰宽由0.1985变成了0.4723，保留时间有5.043min变成了14.956min.而理论塔板数由3576，变成了5555。终于符合了标准系统适应性理论塔板数不低于5000的要求。苦逼的自己，忙活了一整个下午终于把测定条件搞定了，抬头一看早已经过了下班的时间了，急急忙忙把仪器序列运行上。期待第二天的测定结果。

第二天一上班，就赶紧处理昨天晚上分析结果，结果除掉水分的含量只有88.5%。还是低于90%的标准要求。检测结果还是不是很满意，上报领导检测结果。领导指示看看是不是前处理出问题了，于是一个细节性的问题出来了，药典样品前处理中明确要求要是用300W，50KＨz的超声波超声处理45分钟。而我们的超声波清洗器的超声频率只300W，40KHz,超声的频率不够吗？样品没有超好，主要成分没有完全溶解吗？马上行动，更换一台300W,50KHz的超声处理样品和照品溶液。上机分析测试，匆匆忙忙大半天又过去了，好在吃完午饭后，分析结果终于出来了。除掉水分后的含量还是只有88.4%。确认检测结果没问题后，赶紧上报领导，领导看完结果后，很不情愿的说：“下不合格报告吧”。我终于可以松口气了。

总结本次试验的整个过程，难点在于系统适应性理论塔板数的要求。影响塔板数的因素有两个，一是保留时间，另一个是峰宽。他们之间的关系是：塔板数与保留时间成正比，与峰宽成反比。所以保留时间越长，塔板数越大，峰宽越小塔板数越大。

三号柱是短柱保留时间应该更短，而三号柱的保留时间却变长了，原因是我改变了流动相的比例，增加了水相的比例。

值得我们探讨的是为什么很多中药的检测塔板数要求都很高，按照标准的流动相很难满足要求的？如我的峰型很好，塔板数达不到标准要求，会影响到检测结果的准确性吗？

流动相的比例调节的范围一般是多少？