主题：【讨论】耐热芽孢检验

耐热芽孢检验

1 基础
1.1 细菌特殊形态：
1.1.1
芽孢：细菌生长到后期的一种形态（营养不良造成）细胞浓缩形成。
1.1.2
荚膜：某些细菌细胞壁外的一层较松厚，而且较固定的粘液性物质称之。如果粘液性物质没有明显的边缘,则叫粘液层。如果细菌荚膜连在一起，其中包含有许多细菌叫菌胶团
1.1.3
鞭毛：有动力性，用穿刺法（半固体）测
1.1.4
菌毛：比鞭毛更细，较短，直硬，数量也较多的细丝称之
2 概念
2.1 芽孢：一些细菌在其生长后期，在胞内形成一个抗逆性，（热、干燥、压力等）特别强的圆形或椭圆状的原壁厚密的内生孢子称为芽孢。
2.2 培养基：锰盐营养琼脂:每1000mL普通营养琼脂中加硫酸锰(3.08gMnSO4+100mLH2O)1mL（注：现化验室用直接配制好的锰盐营养琼脂混合物，30g加入1000 mL煮沸的蒸馏水中，混匀，溶解。）
3 芽孢总数测定
3.1
样品准备
3.1.1

在无菌操作条件下，将10mL室温状态下的待检样品加入一个灭菌试管中，盖好棉塞。
3.1.2
在同直径的试管中加入10mL同样室温状态下的水，并插入温度计。
3.1.3
将上述两支试管同时放入水浴中保温，待温度计温度升至80℃时开始计时。

3.1.4
计时达10分钟后，迅速将样品管取出，置于冷水中迅速降温至室温。

3.1.5
按无菌操作条件对降温后的样品进行稀释。
中间产品检验选取100的样品稀释液。
问题产品检验选取10 -1至10-2两个稀释度的样品稀释液。
3.2 培养基准备
3.2.1
检查预先经过灭菌处理的锰盐营养琼脂培养基是否处于正常、可用状态。
3.2.2
将高压灭菌后的培养基，冷至45℃左右待用。
3.3 接种培养
3.3.1
在无菌操作条件下，在一个灭菌平皿内倾入15mL锰盐营养琼脂培养基，并暴露至接种过程结束，标记后以作为环境对照样品。
3.3.2
按样品编号在灭菌平皿盖作相应标记。
3.3.3
在无菌操作条件下，用1mL的灭菌吸管移取1mL选定的样品稀释液或样品原样至灭菌平皿内。
3.3.4
同上对同一样品重复操作。即每个选定的样品稀释度做两个平皿。
3.3.5
按以上步骤，以1毫升无菌生理盐水作为空白操作对照。
3.3.6
在无菌操作条件下，将约15mL的锰盐营养琼脂培养基倾入样品平皿中，将平皿置于操作台面上轻轻转动，使样品和培养基混合均匀。

3.3.7
待琼脂凝固后，将平皿翻转，即保持有标记和培养基的一面向上。

3.3.8
将所有平皿（包括空白和环境对照）置于36±1℃的恒温培养箱内，保温培养60---62小时。

3.4菌落计数
3.4.1
计数原则同菌落总数。计数时认准芽孢菌落，必要时要镜检。
3.4.2
检验结果=（平行样品菌落数之和/2）×稀释倍数。
3.4.3
计数结果在100以内，按实际计数报告；100至10000的，按两位有效数字报告，如果样品只做原液时计数结果在100以外，按实际计数报告。
4 耐热芽孢总数测定
4.1 样品准备
4.1.1
在无菌操作条件下，将10mL室温状态下的待检样品加入一个灭菌试管中，盖好棉塞。
4.1.2
在同直径的试管中加入10mL同样室温状态下的水，并插入温度计。
4.1.3
将上述两支试管同时放入水浴中保温，待温度计温度升至100℃开始计时。
4.1.4
计时达10分钟后，迅速将样品管取出，置于冷水中迅速降温至室温。
4.1.5
按无菌操作条件对降温后的样品进行稀释。
4.1.5.1 中间产品检验选取100的样品稀释液。
4.1.5.2
问题产品检验选取10 -1至10-2两个稀释度的样品稀释液。
5 培养基准备
5.1 检查预先经过灭菌处理的锰盐营养琼脂培养基是否处于正常、可用状态。
5.2
用高压灭菌后的培养基，冷至45℃左右待用。
6 接种培养
6.1
在无菌操作条件下，在一个灭菌平皿内倾入约15mL锰盐营养琼脂培养基，并暴露至接种过程结束，标记后以作为环境对照样品。
6.2
按样品编号在灭菌平皿底部作相应标记。
6.3 在无菌操作条件下，用1mL的灭菌吸管移取1mL选定的样品稀释液或样品原样至灭菌平皿内。
6.4 同上对同一样品重复操作。即每个选定的样品稀释度做两个平皿。
6.5
按以上步骤，以1毫升无菌生理盐水作为空白操作对照。
6.6
在无菌操作条件下，将约15mL的锰盐营养琼脂培养基倾入样品平皿中，将平皿置于操作台面上轻轻转动，使样品和培养基混合均匀。
6.7 待琼脂凝固后，将平皿翻转，即保持有标记和培养基的一面向上。
6.8
将所有平皿（包括空白和环境对照）置于55±1℃（注：培养温度针对特殊情况可以特殊对待，但各处统一）的恒温培养箱内，保温培养60---62小时。
7 菌落计数
7.1
计数原则同菌落总数。计数时认准耐热芽孢菌落，必要时要镜检。
7.2 检验结果=（平行样品菌落数之和/2）×稀释倍数。计数结果在100以内，按实际计数报告；100至10000的，按两位有效数字报告样品只做原液时计数结果在100以外，按实际计数报告。