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主题：【已应助】液相色谱中的外标法

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有雨的夜
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发表于：2015/03/23 16:26:36 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
想问一下，一般大家测定一种化合物时，是自建方法还是参照国标呢？
用HPLC定量时，如果使用外标法，那么多久需要重新做一条标准曲线呢？还是每次测定样品的时候，都需要同时测定标准品，绘制新的标准曲线？
在做标准曲线的时候，是配制不同浓度的标准品（比如1mg/25ml,2mg/25ml,4mg/25ml,8mg/25ml,10mg/25ml...），然后进相同的进样量（比如10ul），还是配制1个浓度的标准品然后进不同进样量？
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夏天的雪
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2015/3/23 16:34:53 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
1、有国标的时候通常会根据国标方法去做，如果国标方法不可行就要自建方法了
2、基本每次测定前都进标品的，一是检查仪器性能，二是可以看之前的标曲是否可用，如果不可用，例如时间偏移，峰面积偏差很大就需要重新配制标准曲线；
3、标准一般是配制不同浓度进样，通常不采用改变进样体积的方法进行绘制标曲，通过改变进样体积绘制标曲会减少许多人为误差
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有雨的夜
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2015/3/23 16:46:36 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 夏天的雪(bingwang228) 发表:
1、有国标的时候通常会根据国标方法去做，如果国标方法不可行就要自建方法了
2、基本每次测定前都进标品的，一是检查仪器性能，二是可以看之前的标曲是否可用，如果不可用，例如时间偏移，峰面积偏差很大就需要重新配制标准曲线；
3、标准一般是配制不同浓度进样，通常不采用改变进样体积的方法进行绘制标曲，通过改变进样体积绘制标曲会减少许多人为误差


针对第2条，“每次测定前都进标品的”，是指进一个标样即可，不是很多个？那么，这个标样是上次做曲线用过的呢？还是新配制的呢？如果是上次用过的，怎么保存呢？会不会放置一段时间，样品发生变化呢？（即使在冰箱中）。
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武灵
zhonghuashendun
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2015/3/23 18:49:41 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 有雨的夜(774234134) 发表:
针对第2条，“每次测定前都进标品的”，是指进一个标样即可，不是很多个？那么，这个标样是上次做曲线用过的呢？还是新配制的呢？如果是上次用过的，怎么保存呢？会不会放置一段时间，样品发生变化呢？（即使在冰箱中）。
我建议不论待测组分是否足够稳定，还是重新配制和重新进标样。如果标液在一定时间环境下稳定，那可以利用上次的标液重进甚至是直接利用上次标线。工作标液最好别放置超过一周（即使很稳定，当然你验证过超过一周也很稳定，那另当别论），装标液的容器密封充分，放入冷藏冰箱中。
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dywzqbx
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2015/3/23 23:34:31 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
当确定一个方法的时候需要做标准曲线，一旦确定，以后做的时候就只需要进一个对照作为标尺来测定待测化合物的浓度。
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jsdengxiao
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2015/3/24 9:35:07 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
对于每次都进5个甚至7个标线点，我觉得用几个QC就可以了，没问题就可以不用跑全部的标线了，时间的话sop肯定有保存时间的，要做验证的
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hujiangtao
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2015/3/25 15:34:28 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
可以用单标法
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夏天的雪
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2015/3/25 16:27:52 11楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 有雨的夜(774234134) 发表:
针对第2条，“每次测定前都进标品的”，是指进一个标样即可，不是很多个？那么，这个标样是上次做曲线用过的呢？还是新配制的呢？如果是上次用过的，怎么保存呢？会不会放置一段时间，样品发生变化呢？（即使在冰箱中）。
可以是之前配制的标准溶液，也可以是通过稀释标准储备液后的标准溶液，做一个点是为了验证仪器的性能和标准溶液的稳定性，如果稳定性不好肯定是要重新配制的。可以放在试剂瓶中，密封保存，注意避光和冷藏，有些需要冷冻。
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夏天的雪
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2015/3/25 16:29:02 12楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 武灵(zhonghuashendun) 发表:
我建议不论待测组分是否足够稳定，还是重新配制和重新进标样。如果标液在一定时间环境下稳定，那可以利用上次的标液重进甚至是直接利用上次标线。工作标液最好别放置超过一周（即使很稳定，当然你验证过超过一周也很稳定，那另当别论），装标液的容器密封充分，放入冷藏冰箱中。
理论上是都要重新配制标曲的，但是实际过程中可能比较麻烦，如果标液稳定，就偷偷懒了
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夏天的雪
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2015/3/25 16:30:39 13楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 dywzqbx(dywzqbx) 发表:
当确定一个方法的时候需要做标准曲线，一旦确定，以后做的时候就只需要进一个对照作为标尺来测定待测化合物的浓度。
进一个点的标样，相当于质控样，对标曲和仪器性能进行验证
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夏天的雪
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2015/3/25 16:31:30 14楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 hujiangtao(hujiangtao) 发表:
可以用单标法
单标法最简单，但是许多标准都是要求标曲的
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