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液相色谱法中的流动相主要用水性溶剂、有机溶剂或它们的混合液,但是如何配制?别不重视!因为,选择配制的方法不同,分析结果,特别是保留时间,是会有显著差别的!
一、有机溶剂和水性溶剂的混合方法
有机溶剂和水性溶剂的混合液作为流动相是经常的,但由于混合方法不同,有时分析结果相差很大。如20mM磷酸钠缓冲液(pH2.5)90%与乙腈10%的混合液,混合比为9∶1时,20mM 磷酸钠缓冲液(pH2.5)90%与乙腈10%的体积比为9∶1,也就是可以解释为各自按体积比例的相当量称取后进行混合。另外,按10%乙腈解释,用20mM 磷酸钠缓冲液(pH2.5),将乙腈稀释调制也可以成立。在后者情况下,产生混合体积减少部分,余下的添加20mM 磷酸钠缓冲液。两者虽然没有太大的差别,但由于混合方式不同,分析结果,特别是保留时间,也会有显著的差别,这点必须注意。
二、50%或(V/V=1/1)乙腈水溶液的配制方法
对于用V/V=1/1的表示配制乙腈水溶液,多按这种方法进行:用量筒测定乙腈500mL,用另一量筒测定水500mL,两种液体在瓶内充分摇晃混合。不过 50%乙腈水溶液的表示时,同样也多是按上述方法配制,但查化学辞典时,实际上是按这种方法进行配制:首先将500mL乙腈,注入1L的量瓶中,量瓶边搅拌边加水,等待液温达到室温,用全量水,使溶液到1L。这样一来,用%表示和“V/V”体积比表示,最终得出的流动相组成不同。也就是说,混合溶剂的密度,与由原溶剂密度计算的单纯平均值不相同,所以用上述两种方法调制的流动相组成差异。如在室温(25℃)附近水50mL和乙腈50mL混合时体积不是100mL,而有所减少,约为96mL。在一般情况下,多用操作简便的第一种方法。
三、溶剂体积的温度影响
如前所述,溶液的密度受周围温度的影响。刚从溶剂冷藏箱拿出来的溶液温度与实验室的室温相比,要低不少,乙腈和水混合液因发热反应,溶液温度升高。因此,为能调制再现性好的流动相,建议在使用前用水浴(或热水浴)将液温调到接近室温。