1、在使用高效
液相色谱时,什么时候用梯度方法,什么时候用等梯度方法?
这个是根据方法或者样品出峰时间长短以及分离效果等决定的。
2、HPLC都有那些检测器可以用,是根据什么原理来选择的呢?
请参考高效
液相色谱分析方法的建立这本书
3、
液相色谱为什么要使用缓冲溶液,缓冲溶液中用很多需要加入少量的有机相的目的是什么,缓冲溶液的pH是如何选择的,对于同一个样品如果pH不同,对检测结果有什么样的影响呢?
因为缓冲液对PH值的变化具有较大的缓冲作用,故常用缓冲液控制流动相的pH值,其存在改变了化合物的解离程度,进而影响其与固定相的作用,调节其分配系数,此时流动相的缓冲盐浓度大,不利于样品的解离,使样品较快流出,因此会改善峰形,减小峰宽,抑制拖尾,塔板数自然提高。
-采用反相色谱法分离弱酸(3≤pKa≤7)或弱碱(7≤pKa≤8)样品时,通过调节流动相的pH值,以抑制样品组分的解离,增加组分在固定相上的保留,并改善峰形。对于弱酸,流动相的pH值越小,组分的k值越大,当pH值远远小于弱酸的pKa值时,弱酸主要以分子形式存在;对弱碱,情况相反。分析弱酸样品时,通常在流动相中加入少量弱酸,常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和1%醋酸溶液;分析弱碱样品时,通常在流动相中加入少量弱碱,常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和 30mmol/L三乙胺溶液。
注:流动相中加入有机胺可以减弱碱性溶质与残余硅醇基的强相互作用,减轻或消除峰拖尾现象。所以在这种情况下有机胺(如三乙胺)又称为减尾剂或除尾剂。
4、HPLC相对应的软件有几个,分别是什么?
这个看你们当前用的是什么系统了。
5、HPLC的进样量为5~100ul,那么进3ul会有什么影响,进样量太大会有什么影响呢?
进样量太小响应值太低不精确,太大出峰会拖尾或者柱子有残留(因情况不同)
6、为什么要用甲醇冲柱子,换成乙腈可以吗,如果不行,原因是?
7、为什么要用10:90的甲醇水冲洗柱子,换个比例可以吗,如果不行是因为什么呢?
这两个问题可以是一个问题,一般冲柱子大都是10%左右的甲醇或者乙腈,有的也可能浓度变高主要是对于缓冲盐来说的(怕柱子里边有缓冲盐析出)。至于流动相冲洗的选择也是以缓冲盐开说的,缓冲盐用10%甲醇然后用甲醇封柱子,其他的可以用10%乙腈或者乙腈来冲洗。