液相测试碱性化合物容易出现出峰不好的情况,比如拖尾等等,采用以下几种方法可以改善碱性化合物在液相上的出峰问题:
(1)使用离子对试剂
使用离子对试剂增强碱性化合物的保留,改善碱性化合物峰形。适合碱性化合物的离子对试剂有庚烷磺酸钠、己烷磺酸钠、十二烷基烷磺酸钠等。
酸性条件下,碱性化合物的阳离子会和烷基磺酸根阴离子形成中性离子对,使碱性化合物变成中性化合物,并增强疏水性。
(2)使用“扫尾剂”
最常用的扫尾剂是三乙胺,有时也可以使用二乙胺。当我们发现碱性化合的峰形出现拖尾时,在流动相里添加1%左右的三乙胺,再用磷酸把流动相调回酸性,往往可以起到立竿见影的效果。酸性条件下,三乙胺阳离子和键合相中游离的硅羟基结合,占据键合相中所有与碱性化合物作用的活性中心,屏蔽碱性化合物的二级作用,改善峰形。当遇到碱性比三乙胺更强的碱性化合物时,三乙胺的作用就不明显了。
(3)流动相 pH 值的选择
对碱性化合物来说,流动相的 pH 不仅仅对峰形,还对保留因子和选择性都有很大影响。一般来说,我们建议碱性化合物的流动相 pH≤2.5,会有比较好的峰形。
a.碱性化合物在酸性条件下会解离成离子状态;
b.pH≤2.5 会使固定相游离硅羟基解离受抑制,减小对碱性阳离子的二级反应。当pH=2.5 的时候,解离平衡向左移动,非解离状态的构型会比平衡状态时增加 90%,解离状态的构型降为平衡状态时的 10%。
(4)合理选用缓冲盐
使用缓冲盐的目的主要有两点,其一是使流动相维持在一个相对稳定的 pH 条件;其二是使流动相具有足够的离子强度。那么,选择缓冲盐的类型和浓度就非常重要了。高浓度缓冲盐中金属离子“包裹”游离硅羟基,并呈正电状态,阻断碱性化合物与固定相的二级反应,减小拖尾,改善峰形。缓冲盐的弱酸根(阴离子)作用是维持流动相体系在一个稳定的 pH 环境,提高方法重现性。