实战宝典 原创大赛 仪器问答 仪友会 总帖：8076771今日发帖：245 我的社区 签到
快速导航 采购仪器 提醒
中药/天然药检测
版主:
入住本版
专家:
居民列表

主题：【分享】【“仪”起享奥运】聚合酶链式反应法鉴别之金钱白花蛇

浏览0 回复2 电梯直达
小卡
头像
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
发表于：2024/08/08 14:40:32 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
鉴别｜











聚合酶链式反应法。

模板DNA提取  取本品0.5g，置乳钵中，加液氮适量，充分研磨使成粉末，取50mg，置2.0ml离心管中，加入提取缓冲液200μl（含1%聚乙烯吡咯烷酮-40和1%曲拉通 X-100的0.5mol/L氢氧化钠溶液），充分混匀；加入0.1mol/L Tris-盐酸溶液（pH 8.0）800μl，混匀，离心（转速为每分钟12000转）5分钟；将上清液500μl转移至另一离心管中，加入0.1mol/L Tris-盐酸溶液（pH 8.0）500μl，混匀，离心（转速为每分钟12000转）5分钟；将上清液50μl转移至另一离心管中，加入无菌双蒸水450μ1，混匀，作为供试品溶液，置一20℃保存备用。另取金钱白花蛇对照药材0.5g，同法制成对照药材模板DNA溶液。

PCR反应  鉴别引物：5’GAAATTTCGGCTCTATGCTTATAACCTGTCTTT3’和5’GGAATCTTATCGATATCTGAATTAGTA3’。PCR反应体系：在200μl离心管中进行，反应总体积为25μl，反应体系包括10×PCR缓冲液2.5μl，dNTP（1Ommol/L）1μl，鉴别引物（10μmol/L）各0.2μl，Taq DNA聚合酶（5U/μl）0.2μl，模板DNA 1μl，25%聚乙烯吡咯烷酮-40溶液1μl，10mg/ml牛血清蛋白0.5μl，无菌双蒸水18.4μ1。将离心管置PCR仪，PCR反应参数：95℃预变性5分钟，循环反应30次（95℃30秒，60℃45秒），延伸（72℃）5分钟。

电泳检测 照琼脂糖凝胶电泳法（通则0541），胶浓度为1.5%，每100ml胶中加入10000×核酸凝胶染色剂GelRed 5μl；供试品与对照药材PCR反应溶液的上样最分别为5μl，以DL2000（DNA条带从小到大分别为100bp，250bp，500bp，750bp，1000bp和2000bp）作为DNA分子量标记，进行凝胶电泳检测。电泳结束后，取凝胶片在凝胶成像仪上或紫外透射仪上检视。供试品凝胶电泳图谱中，在与对照药材凝胶电泳图谱相应的位置上，在500～750bp之间应有单一DNA条带，空白对照无条带。















浸出物｜











照醇溶性浸出物测定法（通则2201）项下的热浸法测定，用稀乙醇作溶剂，不得少于15.0%。
为您推荐
近期热榜
热门活动
您可能想找: 气相色谱仪(GC) 询底价
选参数 看心得 找厂商 查方案
专属顾问快速对接
立即提交
可能感兴趣
Ins_6f9028ca
Ins_6f9028ca
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2024/8/8 15:28:57 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
感谢分享！
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
xiahuanihao
xiahuanihao
结帖率：
100%
关注：0 |粉丝：0
新手级： 新兵
2024/8/13 4:56:22 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
了解中药材金钱白花蛇。
赞贴
0
收藏
0
拍砖
0
举报
手机版： 【“仪”起享奥运】聚合酶链式反应法鉴别之金钱白花蛇
猜你喜欢最新推荐热门推荐更多推荐
头像
高级回复 发表评论
品牌合作伙伴
岛津
日立科学仪器
珀金埃尔默仪器（上海）有限公司（PerkinElmer）
日本电子株式会社
丹纳赫
安捷伦
赛默飞世尔科技
普析通用
欧波同
天美
天瑞仪器
德国耶拿
海能技术
马尔文帕纳科
磐诺科技
上海仪电科仪
梅特勒托利多
聚光科技
莱伯泰科
盛瀚
多宁生物
丹东百特
科哲
卓立汉光
屹尧科技
华谱科仪
宝德仪器
优莱博
HORIBA
布鲁克核磁