主题：【分享】【“仪”起享奥运】细胞培养污染有哪些种类

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发表于：2024/08/10 11:47:59 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

一、细菌污染特征：大小在0.5~5 μm，比动物细胞小很多。多呈球状或杆状，形态规则，分布均匀；增殖速度快，一般污染后48~72小时爆发式增殖；营养消耗快，培养基很快变黄，变浑浊；镜下观察有明显的定向运动。

二、真菌污染特征：呈链球状或丝状。常形成肉眼可见的菌落，培养基颜色无变化或变紫，仅对局部细胞影响较大，其他地方生长正常。会形成孢子，容易污染其他细胞。

三、支原体污染特征：最小的微生物，无法通过光学显微镜看见，但可通过电镜观察到。感染支原体的细胞，在某一时间点碎片突然增多，随着传代，细胞状态显著变差。支原体污染可通过气溶胶传播，影响同一细胞房其他细胞。

四、黑胶虫污染特征：无明确定义，镜下无法直接观察到。主要表现为细胞状态差，黑点和碎片多，布朗运动。通过检测发现主要为支原体污染，部分为未知的增殖不明显的微生物污染。

五、霉菌污染特征：培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37℃孵箱培养2-3天，仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差。

六、病毒污染特征：细胞胞状态变差，出现空泡化的现象。细胞一旦发现有污染出现，应及时对所用试剂和耗材进行清理。耗材可更换新的或者重新高压灭菌，试剂可重新过滤除菌或者更换新批次，操作台和细胞房需用消毒液进行全面清洁消杀后方可复苏新的细胞，以免反复出现污染。细胞培养对无菌环境的要求较为严格。微生物污染通常是造成细胞培养失败的主要原因，细胞间的杀菌主要涉及空气的杀菌：

1、紫外线消毒紫外线是一种低能量的电磁辐射，可杀死多种微生物。革兰阴性菌最为敏感，其次是阳性菌，再次为芽孢，真菌孢子的抵抗力最强。紫外线的直接作用是通过破坏微生物的核酸及蛋白质等而使其灭活，间接作用是通过紫外线照射产生的臭氧杀死微生物。直接照射培养室消毒，用法简单，效果好。紫外灯的消毒效果同紫外灯的辐射强度和照射剂量呈正相关，辐射强度随灯距离增加而降低，照射剂量和照射时间呈正比。因此紫外灯同被照射物的距离和照射时间要适合。离地面 2 米的 30W 灯可照射 9 平方米房间，每天照射 2－3 小时，期间可间隔 30 分钟。灯管离地面 2 米以外要延长照射时间，2.5 米照射效果较差。紫外灯照射工作台的距离不应超过 1.5 米，照射时间 30 分钟为宜。由于上述各种情况的不确定性，导致紫外线杀菌效果不是很理想，一般需要过夜杀菌。此外紫外线对人体有伤害作用，紫外灯不仅对皮肤、眼睛伤害，且对培养细胞与试剂等也产生不良影响，因此不要在紫外线灯照射下进行操作。

2、甲醛熏蒸

甲醛是一种高效能化学灭菌剂。不易燃、不爆炸、不腐蚀金属。它能与蛋白质中的氨基酸结合而使蛋白变性，使酶的活性消失。故有强大的杀菌作用。一般称作为“大消”，用来对细胞间进行彻底的消毒杀菌。但是甲醛是一种对人体有害的物质，并且细胞培养实验室一般空气流通都很差，甲醛的排出也很慢，至少要一周以上。如果要紧急使用的话，在甲醛灭菌完后，可以用等量的氨水中和空气中的甲醛。

3、空气过滤

过滤除菌：是将液体或气体用微孔薄膜过滤，使大于孔径的细菌等微生物颗粒阻留，从而达到除菌目的。在体外培养时，过滤除菌大多用于遇热容易变性而失效的试剂或培养液。目前，大多实验室采用微孔滤膜滤器除菌。关键步骤是安装滤膜及无菌过滤过程。

4、干雾过氧化氢灭菌技术

比林科汉干雾过氧化氢灭菌系统是使用文丘里泵连续定量供给消毒液，当微量的液体进入喷嘴后遇到高速载气，气体对液滴产生强力的碰撞和粉碎。空气是以多孔偏心方式进入喷嘴，实现调整离心式旋转，这就增加了气体与液体相互碰撞的距离和力度，使气体对液滴具有更强的撕裂作用，因而能够达到微米雾化的效果。再经干雾系统的强劲动力，迅速将过氧化氢液体颗粒输送至远端扩散至整个空间，从而实现高效灭菌。