冻存细胞复苏后出现白色絮状物不溶解的沉淀,可能的原因有以下几种:
- 蛋白质沉淀: DMSO和血清混合后,在低温下容易导致蛋白质变性沉淀。这种沉淀通常是絮状或颗粒状,不溶于培养基。
- 磷酸钙沉淀: 血清中含有磷酸钙,在低温下也容易析出沉淀。这种沉淀通常是细小的颗粒状,不溶于培养基。
- 细胞碎片: 冻存过程中,部分细胞可能受到损伤破裂,形成细胞碎片。这些碎片可能与蛋白质沉淀一起形成絮状物。
是否能继续培养:- 少量沉淀: 如果沉淀量很少,对细胞生长影响不大,可以继续培养观察。
- 大量沉淀: 如果沉淀量较多,可能会影响细胞贴壁和生长。建议先将细胞离心,去除上清液中的沉淀,再用新鲜培养基重悬细胞,铺板培养。
细胞滤器过滤:使用细胞滤器过滤可以去除大部分沉淀,但并不能完全排除污染的可能性。
是否会演变为细胞污染:- 无菌操作: 如果在复苏和过滤过程中严格执行无菌操作,一般不会引入污染。
- 观察细胞状态: 继续培养时,密切观察细胞形态和生长情况。如果出现异常,及时处理。
建议:- 优化冻存液配方: 尝试降低DMSO浓度或加入海藻糖等保护剂,减少蛋白质沉淀。
- 缓慢复苏: 复苏时,将冻存管迅速放入37℃水浴中,轻轻摇晃使其尽快融化,然后立即加入预热的培养基稀释。
- 及时处理沉淀: 复苏后,尽快将细胞转移到新的培养皿中,避免沉淀对细胞的影响。
如果您不确定沉淀的性质,建议咨询专业的细胞培养实验室或研究人员,进行进一步分析和处理。