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主题：【分享】实验室自制发酵菌

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王小盒
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发表于：2024/08/28 11:52:09 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
在实验室自制发酵菌需要在严格的无菌条件下进行，以下是一般的步骤和注意事项：

一、准备工作


  • 设备和材料准备
    • 超净工作台：提供无菌操作环境。
    • 高压灭菌锅：对培养基、培养皿、移液管等进行灭菌。
    • 恒温培养箱：提供适宜的温度进行菌种培养。
    • 天平、量筒等：用于准确称量和量取试剂。
    • 培养基原料：如蛋白胨、酵母提取物、葡萄糖、琼脂等，根据所需菌种选择合适的培养基。
    • 无菌水、移液管、培养皿、锥形瓶等。

  • 环境消毒
    • 在进行实验前，对实验室进行全面消毒，包括桌面、地面、墙壁等。可以使用紫外线照射、化学消毒剂擦拭等方法。
    • 确保超净工作台的过滤器正常工作，开启超净工作台进行通风和紫外线照射，进一步净化操作环境。


二、菌种来源选择


  • 从自然界分离
    • 可以从土壤、水体、植物表面等环境中采集样品，通过稀释涂布法、平板划线法等分离出单一的菌种。
    • 例如，从果园土壤中采集土样，经过一系列处理后，在特定的培养基上培养，挑选出具有发酵潜力的菌落进行进一步培养和鉴定。

  • 已有菌种保藏中心获取
    • 如果实验室有菌种保藏条件，可以从专业的菌种保藏中心购买或申请所需的菌种，然后进行活化和培养。
    • 在使用外来菌种时，要确保其来源可靠、无致病性和污染风险。


三、培养基制备

  • 按照配方准确称量培养基原料，加入适量的蒸馏水溶解。
  • 将溶解后的培养基装入锥形瓶中，用棉塞或硅胶塞封口。
  • 将锥形瓶放入高压灭菌锅中进行灭菌，一般在 121℃下灭菌 15-20 分钟。
  • 灭菌后的培养基在超净工作台中冷却至适宜温度（一般为 45-50℃），然后倒入无菌培养皿中，待其凝固备用。


四、菌种培养

  • 如果是从自然界分离菌种，将采集的样品进行适当处理后，用无菌移液管吸取少量样品，涂布在培养基表面。
  • 如果是活化已有菌种，用无菌接种环从保藏菌种中挑取少量菌体，划线接种在培养基表面。
  • 将接种后的培养皿放入恒温培养箱中，根据菌种的特性设置适宜的温度和培养时间。例如，乳酸菌一般在 37℃下培养 24-48 小时。


五、菌种筛选和鉴定

  • 观察培养皿中的菌落形态，挑选出具有所需发酵特性的菌落，如形态规则、生长旺盛、有特定颜色等。
  • 对筛选出的菌落进行进一步的鉴定，可以通过显微镜观察菌体形态、生理生化试验、分子生物学方法等确定菌种的种类。
  • 将鉴定后的菌种进行纯化培养，确保菌种的纯度。


六、菌种保存


  • 短期保存
    • 可以将菌种接种在斜面培养基上，放入冰箱冷藏保存，一般可保存数周至数月。
    • 定期转接菌种，以保持其活性。

  • 长期保存
    • 采用冷冻干燥法、液氮保存法等进行长期保存。
    • 冷冻干燥法是将菌种在保护剂的作用下冷冻干燥，然后密封保存于低温环境中。液氮保存法则是将菌种悬浮在液氮中，可长期保持菌种的活性。


七、注意事项


  • 严格无菌操作
    • 在整个实验过程中，要始终保持无菌意识，严格遵守无菌操作规范。所有操作都要在超净工作台中进行，使用的工具和材料都要经过灭菌处理。
    • 避免交叉污染，不同菌种的操作要分开进行，使用的工具和培养皿等要专用。

  • 安全防护
    • 对可能具有致病性的菌种进行操作时，要采取相应的安全防护措施，如佩戴手套、口罩、实验服等，在生物安全柜中进行操作。
    • 严格遵守实验室的安全规定，避免发生意外事故。

  • 记录和标识
    • 对实验过程中的每一个步骤都要进行详细记录，包括菌种来源、培养基配方、培养条件、鉴定结果等。
    • 对培养的菌种进行明确标识，注明菌种名称、培养日期、保存条件等信息，以便于管理和使用。
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