1. 报告描述内容概述

****年**月**日，检验员***查看编号为****的高效液相色谱仪上进行的仪器校验检测数据时，发现空白溶液（水）、浓度为0.5ug/ml、1ug/ml的样品溶液中出现倒峰且出现了基线紊乱的现象。

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在之后的调查中一直未找到可以指认的原因，本人于****年**月**日全面接手该项调查，以下为调查过程、调查思路分析和本人认为导致此次偏差的原因。

上图为空白溶液（水）的倒峰图

2. 调查步骤及相应的思路分析

2.1 步骤1：更换六通阀。

根据色谱峰成型原理，本次偏差所出现的倒峰保留时间刚好与样品自六通阀处流进后，流入检测器的时间一致，在之前清洗和更换六通阀核心部件（转子密封圈）无效后，采取更换整个六通阀的方式进行调查。

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通过连续3针空白溶液（水）的确认，倒峰未改善，可排除六通阀的影响因素。

2.2 步骤2：更换定量环。

在更换六通阀无效后，考虑样品溶液在进样前会先进入定量环定量，再通过针座（针座已在之前的调查中被排除）进入六通阀。通过更换定量环的方式进行调查。

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通过连续3针空白溶液（水）的确认，倒峰未改善，可排除定量环的影响因素。

2.3 步骤3：安装鬼峰补集小柱。

通过更换进样器与样品溶液存在接触可能的部件进行调查，均未发现可指认的原因后，可初步排除进样过程中，由于进样过程导致样品溶液污染的可能性。

分析倒峰产生的原因为：流动相在可变波长扫描紫外检测器中的吸收值大于样品溶液。

如果流动相在进入仪器后发生改变，产生其它可被检测器吸收的物质，进而引起与空白溶液的吸收不一致，产生倒峰现象。

安装鬼峰补集小柱，确认流动相中存在其它可被检测器吸收的物质，并且该物质可被鬼峰补集小柱去除。

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通过连续3针空白溶液（水）的确认，倒峰未改善，可确认鬼峰补集小柱无效。

2.4 步骤4：取仪器各个接口处流出的流动相充当空白溶液。

由于无法采取外部插件的方式去除仪器内流动相与空白的差异，调查方向转为排查仪器各部件对流动相是否存在影响。

接取排液阀出口端溶液；柱温箱进口端溶液；检测器出口端溶液进行测试。

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排液阀出口端溶液。Discharge valve outlet end solution.

柱温箱进口端溶液。Column temperature box inlet end solution.

检测器出口端溶液。

通过以上排查，可以确认以下几件事：

1	排液阀出口端溶液倒峰明显变小，可确认排液阀前的流路中存在较多的影响流动相性质的物质。倒峰并未完全消失，证明排液阀后的流路中也存在少量影响流动相性质的物质，但相对排液阀前偏少。
2	柱温箱进口端溶液倒峰完全消失，证明柱温箱进口端至检测器的流路不存在影响流动相性质的物质。
3	检测器出口端溶液出现较小的倒峰，证明检测器中存在较微量的影响流动相性质的物质。

2.5 步骤5：进一步排查仪器各个部件的影响。

取流动相溶液；脱气机出口端溶液；比例阀出口端溶液；检测器进口端溶液进行测试。

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流动相溶液。

脱气机出口端溶液。

比例阀出口端溶液。

检测器进口端溶液。

通过以上排查，可以确认以下几件事：

1	流动相溶液与原检测用的空白溶液一致。
2	脱气机出口端溶液与原检测用的空白溶液一致，排除脱气机影响。
3	比例阀出口端溶液检测后出现较大的正峰，证明比例阀处存在影响流动相紫外吸收性质的物质。
4	检测器进口端溶液检测后出现较小的正峰，该结果与步骤3的柱温箱进口端溶液检测结果相悖，怀疑仪器流路中影响流动相紫外吸收性质的物质并不是以定量的方式流出或仪器中同时存在两种或多种增加紫外吸收值和减小紫外吸收值的物质。

通过上述测试，可确认比例阀是引起倒峰的最主要原因。

2.6 步骤6：更换比例阀。

更换比例阀，使用流动相作为空白溶液进行测试，用来确认步骤5的推测是否正确。

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通过连续3针进样，倒峰明显变小，证明比例阀确实是导致本次偏差的最主要原因。

2.7 步骤7：确认比例阀无污染和校验测试的可行性。

接取新更换的比例阀出口端溶液；排液阀出口端溶液和原校验测试的最低浓度溶液（0.5μg/ml咖啡因水溶液）进行测试。

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比例阀出口端溶液。

排液阀出口端溶液。

0.5μg/ml咖啡因水溶液。

通过以上排查，可以确认以下几件事：

1	新更换的比例阀内不存在可以影响流动相紫外吸收性质的物质。
2	比例阀至排液阀出口端存在较少量的影响流动相紫外吸收性质的物质。
3	目前仪器系统内残余的可影响流动相紫外吸收性质的物质，并不影响依据“液相校准程序”对于高效液相色谱仪进行的校验测试。

3. 影响评估

由于本次导致偏差的倒峰，出峰位置刚好卡在仪器死体积处，且该物质只会影响死体积处的出峰，并不会影响到样品的正常检测。而通过更换比例阀，已经可以解决最低浓度溶液显现倒峰的情况，并不影响校验测试的进行。

综合成本和目前并不影响实验测试的方面进行考虑，不再继续更换仪器部件来满足完全消除该物质。

4. 根本原因确认

以往检测过程中的流动相残余物质，残留在系统流路中，影响本次检测的流动相（水）的紫外吸收性质。

该残余物质并不会在正常检测过程中显现出来，也并不会影响到正常的检测，所以一直未被发现，直到本次的仪器校验测试。

5. 纠正与预防措施CAPA

增加热水冲洗仪器的频次。

6. 导致本次偏差的比例阀处摄影。